本文關(guān)鍵詞：紫紅素與氟康唑影響白念珠菌生物膜形成的比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)擬通過體外構(gòu)建白念珠菌生物膜的可重復(fù)模型,觀察分析紫紅素和氟康唑?qū)Π啄钪榫锬ば螒B(tài)結(jié)構(gòu)及線粒體的影響,并從基因角度檢測黏附相關(guān)基因ALS1、ALS4、EFG1和HWP1的表達(dá)水平變化,以期初步探索紫紅素對白念珠菌生物膜黏附過程的抑制機(jī)制。方法：1.白念珠菌生物膜構(gòu)建及鑒定：選擇白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC90028體外構(gòu)建生物膜模型,利用倒置相差顯微鏡、掃描電鏡及激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜的形態(tài)結(jié)構(gòu),并通過XTT減低法測定白念珠菌生物膜的動力生長曲線,明確生長對數(shù)期及衰亡期。2.紫紅素和氟康唑?qū)Π啄钪榫锬ば纬蛇^程的影響：通過XTT減低法和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)確定紫紅素的最佳作用濃度,并通過倒置相差顯微鏡、掃描電鏡及激光共聚焦顯微鏡三種方法觀察藥物作用后生物膜的結(jié)構(gòu)變化情況。3.紫紅素和氟康唑?qū)Π啄钪榫锬ゐじ竭^程的影響：倒置相差顯微鏡下觀察紫紅素和氟康唑?qū)︷じ竭^程的影響；利用稱量于重的方法、基因檢測ALS1、ALS4、EFG1和HWP1表達(dá)水平的變化定量分析紫紅素和氟康唑?qū)︷じ竭^程的影響,并通過激光共聚焦顯微鏡觀察紫紅素和氟康唑?qū)ι锬ぞ�粒體的影響,初步探索黏附作用機(jī)制。結(jié)果：1.白念珠菌生物膜的體外模型穩(wěn)定且可重復(fù)性高,鏡下生物膜呈典型的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),0.01%結(jié)晶紫染色后可見菌絲結(jié)構(gòu)及胞外基質(zhì)。白念珠菌生物膜的動力生長曲線基本呈“S”型,對數(shù)生長期大約為12～48h,穩(wěn)定期為48～60h為,60h后開始進(jìn)入衰亡期。2.XTT減低法和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)確定紫紅素最佳作用濃度為20gg/mL,該濃度既能達(dá)到良好的抑制作用,又不致于對人體正常成纖維細(xì)胞造成傷害；倒置相差顯微鏡、掃描電鏡及激光共聚焦顯微鏡下可觀察到不同濃度紫紅素和氟康唑作用后生物膜的形態(tài),20μg/mL紫紅素作用后的生物膜不能形成正常的菌絲且結(jié)構(gòu)松散、胞外基質(zhì)幾乎沒有。3.倒置相差顯微鏡下20μg/mL紫紅素作用2h的生物膜細(xì)胞量少于128μg/mL氟康唑組及正常對照組；作用48后,經(jīng)消化離心、干燥后的生物膜重量,同樣是20μg/mL紫紅素組干重量最低,與其余兩組相比P值均小于0.05；基因ALS1、ALS4、EFG1和HWP1的表達(dá)量卻高于128μg/mL氟康唑組,低于正常對照組,兩兩比較所得P值均小于0.05；激光共聚焦顯微鏡下,紫紅素作用后生物膜中線粒體的活性明顯減弱。結(jié)論：1.白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC90028可在體外形成生物膜結(jié)構(gòu),且所構(gòu)建的生物膜模型穩(wěn)定性好、重復(fù)性高。2.與氟康唑組和正常對照組相比,紫紅素對白念珠菌生物膜的形成具有明顯地抑制作用。3.與氟康唑組和正常對照組相比,紫紅素對白念珠菌生物膜的黏附過程具有明顯的抑制作用,除通過抑制黏附相關(guān)基因ALS1、ALS4、EFG11和HWP1的表達(dá)水平,尚通過線粒體相關(guān)的其他途徑發(fā)揮抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：白念珠菌 生物膜 紫紅素 氟康唑 黏附
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R379.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-13
• 第一部分 口腔白念珠菌生物膜模型的構(gòu)建13-22
• 引言13-14
• 材料與方法14-17
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-20
• 討論20-22
• 第二部分 紫紅素和氟康唑?qū)Π啄钪榫锬さ挠绊?/span>22-38
• 引言22-24
• 材料與方法24-28
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-36
• 討論36-38
• 第三部分 紫紅素和氟康唑?qū)Π啄钪榫锬ゐじ竭^程的影響38-52
• 引言38-39
• 材料與方法39-43
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-49
• 討論49-52
• 全文總結(jié)52
• 研究特色與創(chuàng)新52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附錄 綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 在讀期間發(fā)表論文65-66
• 本課題資助基金66-67
• 致謝67-69

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：紫紅素與氟康唑影響白念珠菌生物膜形成的比較，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：441567