本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型VP1蛋白在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)腸道病毒71型VP1蛋白并對其進(jìn)行純化。方法首先通過化學(xué)合成法合成EV71 VP1基因,然后將EV71 VP1基因插入到供體質(zhì)粒pFast Bac1中,構(gòu)成重組質(zhì)粒pFast Bac1-VP1,再轉(zhuǎn)入JM190感受態(tài)細(xì)菌擴(kuò)增,然后提取重組質(zhì)粒pFast Bac1-VP1轉(zhuǎn)入DH10BacTM感受態(tài)細(xì)胞,通過轉(zhuǎn)座從而獲得重組質(zhì)粒bacmid-VP1,采用脂質(zhì)體Cellfectin Reagent將重組質(zhì)粒bacmid-VP1轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞。通過SDS-PAGE、Western blot法檢測目的蛋白的水平,經(jīng)鎳離子親和層析,純化VP1蛋白。結(jié)果 SDS-PAGE及Western blot法檢測獲得蛋白的相對分子質(zhì)量與預(yù)期結(jié)果一致。Bradford分析純化后蛋白的濃度為70μg/m L,純化度達(dá)90%。結(jié)論利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)EV71 VP1蛋白。
【作者單位】： 江蘇大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)研究所;江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗科;鎮(zhèn)江市疾病預(yù)防控制中心檢驗科;
【關(guān)鍵詞】： EV VP蛋白 昆蟲-桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81101227) 鎮(zhèn)江市社會發(fā)展項目(SH2012036)
【分類號】：R392
【正文快照】： 腸道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原之一[1-2],多發(fā)生于5歲以下兒童,其最主要臨床癥狀表現(xiàn)為發(fā)熱,手、足、口腔黏膜等部位出現(xiàn)皰疹。少數(shù)患兒可出現(xiàn)嚴(yán)重的與神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的并發(fā)癥,如腦干腦炎、腦脊髓炎、無菌性腦

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本文編號：417933