本文關(guān)鍵詞：Calpain2在梗阻性黃疸大鼠模型肝組織中的表達(dá)及中藥的干預(yù)作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 本研究通過建立梗阻性黃疸SD大鼠肝損害模型,觀察梗阻性黃疸時(shí)calpain2在大鼠肝組織中的表達(dá)變化；探討梗阻性黃疸術(shù)后中藥茵陳蒿湯對(duì)肝臟的保護(hù)作用及與calpain2表達(dá)的關(guān)系,為臨床圍手術(shù)期合理應(yīng)用中藥提供理論依據(jù)。 方法： 選擇成年SD大鼠160只體重(250-270)g,雄性,動(dòng)物級(jí)別為清潔級(jí),隨機(jī)將大鼠分組：(1)假手術(shù)對(duì)照組(S組)40只；(2)梗阻性黃疸組(O組)40只；(3)梗阻性黃疸模型+中藥組(OC組)40只；(4)梗阻性黃疸模型+生理鹽水組(OW組)40只。四組分別于術(shù)后1、3、5、7D,每個(gè)時(shí)相點(diǎn)處死大鼠10只,留取血清及肝組織。檢測(cè)血清中TBIL、ALT、AST等生化指標(biāo)含量；另取肝組織固定于5%中性福爾馬林溶液,石蠟包埋,5μmm切片行HE染色觀察肝組織的病理改變,并免疫組化檢測(cè)肝組織calpain2的表達(dá)；剩余肝組織經(jīng)液氮速凍后置于-80℃冰箱,用western blot測(cè)肝組織中calpain2蛋白表達(dá)變化；用Real-Time PCR檢測(cè)大鼠肝組織m-calpain基因表達(dá)量情況。 結(jié)果： 1.血清生化指標(biāo)的變化：S組術(shù)后第1天ALT、AST輕度升高,后逐漸降低到正常值范圍,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與S組比較,O組術(shù)后ALT、AST迅速增高,ALT迅速增高,并維持較高水平,之后逐漸下降(P0.05)。OC組與OW組ALT、AST均升高,且均在術(shù)后第一天達(dá)到最大值,之后逐漸降低。OC組在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)ALT、AST的值均低于OW組。S組術(shù)后TBIL無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與S組比較,O組梗阻后TBIL迅速增高,并于第3天達(dá)到峰值(P0.05),后緩慢下降。兩組TBIL均升高明顯,TBIL值術(shù)后迅速升高,并于第三天達(dá)到峰值,之后緩慢下降；OC組在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)TBIL值均低于OW組。 2.肝組織病理學(xué)改變：S組肝細(xì)胞無腫脹、壞死,肝細(xì)胞索排列整齊。O組大鼠肝組織可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn),細(xì)小膽管和無管腔的小膽管增生,纖維組織細(xì)胞增生,肝細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死。OW組術(shù)后1大見少量嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；術(shù)后第3天肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂更加明顯,甚至不能分辨小葉結(jié)構(gòu),肝細(xì)胞形態(tài)大小不,廣泛變性,術(shù)后第5天,細(xì)胞形態(tài)大小不一,小葉內(nèi)有明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn),門管區(qū)中度炎癥,部分標(biāo)本可見局灶性竇周纖維組織沉積形成纖維間隔。術(shù)后第7天肝細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死發(fā)生率增加及程度加重,重者見片狀出血和壞死。OC組術(shù)后病理改變與OW組基本一致,但病理改變程度上較OW組輕。 3.采用、vestern blot測(cè)肝組織中calpain2蛋白表達(dá)變化：在蛋白水平上,以GAPDH為內(nèi)參,以S組為對(duì)照組,O組calpain2蛋白的含量與之比較,各時(shí)相點(diǎn)均出現(xiàn)明顯差異(P0.05),O組calpain2蛋白表達(dá)水平高于S組。以O(shè)W組為對(duì)照組,OC組calpain2蛋白的含量與之比較,各時(shí)相點(diǎn)均出現(xiàn)明顯差異(P0.05),OC組calpain2蛋白表達(dá)水平低于OW組。O組、OW組、OC組隨著造模時(shí)間延長(zhǎng),calpain2蛋白表達(dá)均呈上升趨勢(shì)。 4.免疫組化檢測(cè)肝組織calpain2的表達(dá)：光鏡下,正常組大鼠肝臟內(nèi)表達(dá)較少的calpain2蛋白。隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),O組、OW組、OC組calpain2蛋白陽性表達(dá)量逐漸增加,主要表達(dá)于肝細(xì)胞胞漿內(nèi),偶見在細(xì)胞核表達(dá)。與對(duì)照組比較P0.05。 5、Real-Time PCR檢測(cè)大鼠肝組織m-calpain基因表達(dá)量情況：S組m-calpain基因表達(dá)水平隨造模時(shí)間加長(zhǎng)無明顯變化。O組m-calpain基因表達(dá)水平隨造模時(shí)間加長(zhǎng)升高,O組與S組比較：O組n-calpain基因表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)均高于S組(P0.05)。OW組、OC組m-calpain基因表達(dá)水平隨造模時(shí)間加長(zhǎng)升高,OC組與OW組比較：OC組m-calpain基因表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)均低于OW組(P0.05)。 結(jié)論： 1.OJ時(shí),隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),calpain2蛋白及m-calpain基因表達(dá)水平呈逐漸增加趨勢(shì),表明在OJ大鼠模型中,存在ERS,且凋亡指數(shù)逐漸增加。 2.OJ大鼠給予中藥茵陳蒿湯可以抑制calpain2蛋白的表達(dá),減少因calpain2蛋白高表達(dá)引起的肝細(xì)胞損傷,改善肝臟因梗阻引起的肝功能異常。m-calpain基因表達(dá)水平與梗阻性黃疸肝損傷程度變化一致,提示m-calpain參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡發(fā)生與發(fā)展過程。臨床治療OJ患者可以辯證使用該方劑,促進(jìn)術(shù)后肝臟功能恢復(fù),降低并發(fā)癥發(fā)生率。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 梗阻性黃疽 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 需鈣蛋白酶-2 茵陳蒿湯
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R-332;R575
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 第一部分 膽道梗阻后大鼠肝臟的calpain 2表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究15-36
• 1.1 對(duì)象和方法15-26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組15
• 1.1.2 動(dòng)物造模15-16
• 1.1.3 標(biāo)本的采集16
• 1.1.4 觀察指標(biāo)及方法16-26
• 1.2 結(jié)果26-32
• 1.2.1 大鼠一般狀態(tài)的觀察26-27
• 1.2.2 大鼠血清ALT、AST的含量27-28
• 1.2.3 大鼠血清總膽紅素(TB1L)的含量28-29
• 1.2.4 光鏡觀察肝組織的病理改變29
• 1.2.5 Western blot肝組織calpain 2蛋白的表達(dá)結(jié)果29-30
• 1.2.6 免疫組化檢測(cè)肝組織calpain 2蛋白的表達(dá)30-31
• 1.2.7 Real-Time PCR檢測(cè)大鼠肝組織m-calpain基因表達(dá)結(jié)果31-32
• 1.3 討論32-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 第二部分 茵陳蒿湯對(duì)膽道梗阻后大鼠肝臟calpain 2表達(dá)及肝功能影響的研究36-47
• 2.1 對(duì)象和方法36-37
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組36
• 2.1.2 動(dòng)物造模36
• 2.1.3 中藥方劑36
• 2.1.4 標(biāo)本的采集36
• 2.1.5 觀察指標(biāo)及方法36-37
• 2.2 結(jié)果37-42
• 2.2.1 大鼠一般狀態(tài)的觀察37
• 2.2.2 大鼠血清ALT、AST的含量37-39
• 2.2.3 大鼠血清總膽紅索(TBIL)的含量39
• 2.2.4 光鏡觀察肝組織的病理改變39
• 2.2.5 Western blot肝組織calpain 2蛋白的表達(dá)結(jié)果39-40
• 2.2.6 免疫組化檢測(cè)肝組織calpain 2蛋白的表達(dá)定量結(jié)果40-41
• 2.2.7 Real-Time PCR檢測(cè)大鼠肝組織m-calpain基因表達(dá)結(jié)果41-42
• 2.3 討論42-46
• 2.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 附錄52-56
• 綜述 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡中的作用及中藥的干預(yù)機(jī)制56-66
• 綜述參考文獻(xiàn)61-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李佩文;;生化指標(biāo)及影像醫(yī)學(xué)在茵陳蒿湯退黃作用中的參考價(jià)值[J];中華中醫(yī)藥雜志;2008年12期

2 曹宜,董自波,朱荃;茵陳蒿湯提取物保肝作用的血清藥理學(xué)研究[J];甘肅中醫(yī);2003年07期

3 曲長(zhǎng)江,王文麗,吳諳詔,秦微,曲靜;中醫(yī)黃疸動(dòng)物模型的建立[J];遼寧中醫(yī)雜志;2005年10期

4 曲長(zhǎng)江;秦微;曲靜;吳諳詔;林庶茹;夏淑杰;;茵陳蒿湯對(duì)β-葡萄糖醛酸酶UDPGT影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;2006年02期

5 楊佼;呂文良;;中醫(yī)黃疸病因病機(jī)研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2010年10期

6 董巖;王新芳;崔長(zhǎng)軍;付風(fēng)剛;;茵陳蒿的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J];時(shí)珍國醫(yī)國藥;2008年04期

7 江海燕;但自力;王暉;林菊生;;Effect of ATRA on Contents of liver Retinoids, Oxidative Stress and Hepatic Injury in Rat Model of Extrahepatic Cholestasis[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2007年05期

8 王永林;;肝纖維化的病因病機(jī)與中醫(yī)藥治療初探[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2011年36期

9 張喜平;仇鳳梅;倪杰;;中藥復(fù)方輔助治療肝外阻塞性黃疸的研究概況[J];世界華人消化雜志;2006年33期

10 寇麗,李珊珊,齊清會(huì),薛承銳,吳咸中;活血化瘀與清熱利膽中藥協(xié)同對(duì)急性膽管炎大鼠肝臟的保護(hù)作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2004年02期

  本文關(guān)鍵詞：Calpain2在梗阻性黃疸大鼠模型肝組織中的表達(dá)及中藥的干預(yù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：417784