本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌Rv1419 DNA疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的世界性傳染病,尤其是在發(fā)展中國(guó)家形勢(shì)更加嚴(yán)峻,我國(guó)是世界上結(jié)核病發(fā)病率最高的22個(gè)國(guó)家之一,結(jié)核病患病人數(shù)僅次于印度,位居第二。卡介苗是目前唯一應(yīng)用于結(jié)核的預(yù)防性疫苗,但對(duì)于成人肺結(jié)核的保護(hù)效力十分有限,再加上其自身的不足以及外界因素的變化,研制新型的結(jié)核疫苗對(duì)于結(jié)核病的防治來(lái)講顯得尤為重要。 DNA疫苗是一種常見(jiàn)的基因疫苗,1993年Ulmer等首篇研究報(bào)道發(fā)表在Science上之后,該發(fā)現(xiàn)立即被視為疫苗領(lǐng)域的一場(chǎng)革命,開(kāi)辟了疫苗研究的新時(shí)代。從此,基因疫苗成為世界矚目的防治傳染病的研究新熱點(diǎn)。 本研究應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建新型的結(jié)核分枝桿菌DNA疫苗,即pVAX1-Rvl419重組質(zhì)粒,并評(píng)價(jià)了該疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性。 一、Rv1419基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建 以H37Rv基因組為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增rv1419基因,獲得長(zhǎng)401bp的rv1419基因片段,回收目的基因片段插入pGEM-T載體中,經(jīng)酶切鑒定與序列測(cè)定證實(shí)后,雙酶切回收目的基因片段,再與雙酶切后的真核表達(dá)載體pVAX1連接,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-Rv1419。重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-Rv1419經(jīng)酶切鑒定及基因測(cè)序證實(shí)構(gòu)建成功。應(yīng)用金牌超量無(wú)內(nèi)毒素試劑盒大量提取并純化質(zhì)粒DNA。 二、Rv1419DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性評(píng)價(jià) 將50只BALB/c雌性小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只,分別用生理鹽水、pVAX1載體、微卡菌苗、Ag85A DNA疫苗、Rv1419DNA疫苗免疫,通過(guò)雙側(cè)脛前肌注射的方法免疫小鼠,每2周免疫1次,共免疫3次,第3次免疫后3周殺死小鼠。通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清中抗Rv1419的IgG抗體；利用ELISA方法檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ和IL-4表達(dá)水平；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)分泌IFN-γ的Thl和分泌IL-4的Th2細(xì)胞百分比以及Th1/Th2比值。結(jié)果顯示Rv1419DNA疫苗免疫的小鼠特異性抗體IgG高于生理鹽水組和載體質(zhì)粒組(P0.05),與微卡菌苗組無(wú)顯著性差異。Rv1419DNA疫苗組脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ水平顯著高于生理鹽水組、載體質(zhì)粒組和微卡菌苗組(P0.05),但低于Ag85A DNA疫苗組。Rv1419DNA疫苗組Thl細(xì)胞百分比顯著高于生理鹽水組和載體組(p0.01),且Th1/Th2細(xì)胞比值顯著高于生理鹽水組和載體組(P0.01),與微卡菌苗組和Ag85A DNA疫苗組無(wú)顯著性差異。 綜上所述,本研究成功構(gòu)建了結(jié)核分枝桿菌Rv1419DNA疫苗,即pVAX1-Rv1419重組質(zhì)粒,并且證明此疫苗有較強(qiáng)的免疫原性,主要刺激Thl型細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,但比Ag85A DNA疫苗免疫原性弱,有待進(jìn)一步研究其應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 DNA疫苗 Ag85A Rv1419 免疫原性
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮寫(xiě)9-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-28
• 結(jié)果28-31
• 附圖31-37
• 附表37-38
• 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王應(yīng)平;;微卡聯(lián)合常規(guī)抗癆藥物治療初復(fù)治涂陽(yáng)肺結(jié)核的臨床效果觀察[J];臨床肺科雜志;2011年01期

2 韓惠明;;母牛分枝桿菌菌苗輔助治療復(fù)治肺結(jié)核的臨床觀察[J];青海醫(yī)藥雜志;2011年01期

3 劉蓉娜;方習(xí)靜;張愛(ài)華;楊曉明;張雅婷;閉蘭;;結(jié)核DNA疫苗質(zhì)粒pVAX1-Rv3407的構(gòu)建及體外表達(dá)[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年02期

4 吳雪瓊,李洪敏,史迎昌,張俊仙,張靈霞,梁建琴,金關(guān)甫,由昆,張軍芝;兩種結(jié)核DNA疫苗的免疫原性和保護(hù)效力[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年06期

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌Rv1419 DNA疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：408862