本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌Rv1419 DNA疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的世界性傳染病,尤其是在發(fā)展中國家形勢更加嚴峻,我國是世界上結(jié)核病發(fā)病率最高的22個國家之一,結(jié)核病患病人數(shù)僅次于印度,位居第二�？ń槊缡悄壳拔ㄒ粦糜诮Y(jié)核的預防性疫苗,但對于成人肺結(jié)核的保護效力十分有限,再加上其自身的不足以及外界因素的變化,研制新型的結(jié)核疫苗對于結(jié)核病的防治來講顯得尤為重要。 DNA疫苗是一種常見的基因疫苗,1993年Ulmer等首篇研究報道發(fā)表在Science上之后,該發(fā)現(xiàn)立即被視為疫苗領(lǐng)域的一場革命,開辟了疫苗研究的新時代。從此,基因疫苗成為世界矚目的防治傳染病的研究新熱點。 本研究應用分子克隆技術(shù)構(gòu)建新型的結(jié)核分枝桿菌DNA疫苗,即pVAX1-Rvl419重組質(zhì)粒,并評價了該疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性。 一、Rv1419基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建 以H37Rv基因組為模板,通過PCR擴增rv1419基因,獲得長401bp的rv1419基因片段,回收目的基因片段插入pGEM-T載體中,經(jīng)酶切鑒定與序列測定證實后,雙酶切回收目的基因片段,再與雙酶切后的真核表達載體pVAX1連接,構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pVAX1-Rv1419。重組真核表達質(zhì)粒pVAX1-Rv1419經(jīng)酶切鑒定及基因測序證實構(gòu)建成功。應用金牌超量無內(nèi)毒素試劑盒大量提取并純化質(zhì)粒DNA。 二、Rv1419DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性評價 將50只BALB/c雌性小鼠隨機分為5組,每組10只,分別用生理鹽水、pVAX1載體、微卡菌苗、Ag85A DNA疫苗、Rv1419DNA疫苗免疫,通過雙側(cè)脛前肌注射的方法免疫小鼠,每2周免疫1次,共免疫3次,第3次免疫后3周殺死小鼠。通過ELISA方法檢測血清中抗Rv1419的IgG抗體；利用ELISA方法檢測小鼠脾淋巴細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ和IL-4表達水平；應用流式細胞術(shù)檢測外周血單個核細胞內(nèi)分泌IFN-γ的Thl和分泌IL-4的Th2細胞百分比以及Th1/Th2比值。結(jié)果顯示Rv1419DNA疫苗免疫的小鼠特異性抗體IgG高于生理鹽水組和載體質(zhì)粒組(P0.05),與微卡菌苗組無顯著性差異。Rv1419DNA疫苗組脾淋巴細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ水平顯著高于生理鹽水組、載體質(zhì)粒組和微卡菌苗組(P0.05),但低于Ag85A DNA疫苗組。Rv1419DNA疫苗組Thl細胞百分比顯著高于生理鹽水組和載體組(p0.01),且Th1/Th2細胞比值顯著高于生理鹽水組和載體組(P0.01),與微卡菌苗組和Ag85A DNA疫苗組無顯著性差異。 綜上所述,本研究成功構(gòu)建了結(jié)核分枝桿菌Rv1419DNA疫苗,即pVAX1-Rv1419重組質(zhì)粒,并且證明此疫苗有較強的免疫原性,主要刺激Thl型細胞介導的免疫應答,但比Ag85A DNA疫苗免疫原性弱,有待進一步研究其應用價值。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 DNA疫苗 Ag85A Rv1419 免疫原性
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮寫9-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-28
• 結(jié)果28-31
• 附圖31-37
• 附表37-38
• 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-45
• 綜述45-56
• 參考文獻52-56
• 致謝56-57
• 個人簡歷57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王應平;;微卡聯(lián)合常規(guī)抗癆藥物治療初復治涂陽肺結(jié)核的臨床效果觀察[J];臨床肺科雜志;2011年01期

2 韓惠明;;母牛分枝桿菌菌苗輔助治療復治肺結(jié)核的臨床觀察[J];青海醫(yī)藥雜志;2011年01期

3 劉蓉娜;方習靜;張愛華;楊曉明;張雅婷;閉蘭;;結(jié)核DNA疫苗質(zhì)粒pVAX1-Rv3407的構(gòu)建及體外表達[J];中國生物制品學雜志;2012年02期

4 吳雪瓊,李洪敏,史迎昌,張俊仙,張靈霞,梁建琴,金關(guān)甫,由昆,張軍芝;兩種結(jié)核DNA疫苗的免疫原性和保護效力[J];中華微生物學和免疫學雜志;2001年06期

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌Rv1419 DNA疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：408862