本研究將微生物學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)和生物材料學(xué)等多學(xué)科有機(jī)結(jié)合起來，運(yùn)用基因重組技術(shù)構(gòu)建了可示蹤的防齲基因疫苗；對可生物降解材料作為防齲基因疫苗釋放系統(tǒng)進(jìn)行了研究；并對防齲基因疫苗在體內(nèi)外的表達(dá)以及不同方式免疫的BALB／C小鼠的特異性抗體進(jìn)行了檢測。通過GFP的指示作用及免疫組化方法，對防齲基因疫苗在體內(nèi)外的表達(dá)進(jìn)行初步的示蹤研究，為防齲基因疫苗的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。本研究共包括四個(gè)部分。 第一，本研究構(gòu)建了以綠熒光蛋白基因作為報(bào)告基因的可示蹤的防齲基因疫苗。利用PCR方法，擴(kuò)增變異鏈球菌(Streptococci mutans，S．mutans)MT8148菌株表面蛋白抗原PAC氨基端的基因片段pac-A(1.3Kb)。PCR產(chǎn)物與真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1雙酶切，并回收相應(yīng)DNA片段后，采用DNA連接試劑盒進(jìn)行連接重組，轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化子中的重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定，獲得了4.7Kb與1.3Kb兩個(gè)片段；重組質(zhì)粒中插入基因的序列測定表明，該插入序列與pac全基因的314-1630bp的核酸序列完全相同，插入基因的兩側(cè)分別與Kpn Ⅰ和Apa Ⅰ酶切位點(diǎn)的序列一致，插入基因的上游有...

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 可示蹤的防齲基因疫苗的構(gòu)建
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    附圖
第二部分 重組質(zhì)粒在體外哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    附圖
第三部分 防齲基因疫苗DNA／PELA微球的制備、性質(zhì)及其體外轉(zhuǎn)染的研究
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    附圖
第四部分 防齲基因疫苗及其PELA微球免疫BALB／c小鼠的實(shí)驗(yàn)研究
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    附圖
主要參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 基因轉(zhuǎn)移中非病毒運(yùn)載體系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3998625