本文關鍵詞：EPO預處理對LIR大鼠肝臟微循環(huán)的保護，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過建立大鼠雙后肢肢體缺血再灌注損傷（1imb Ischemia ReperfusionInjury，LIRI）模型，觀察促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）預處理對LIRI后的大鼠肝臟及肝臟微循環(huán)的保護作用。探究缺血再灌注損傷（IschemiaReperfusion Injury，IRI）后活體的大鼠肝臟微循環(huán)血流量變化、肝臟組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）蛋白含量水平的區(qū)別、氧化應激（Oxidative Stress）損傷程度、肝臟組織形態(tài)變化等。探討這一系列變化與EPO對肝臟微循環(huán)保護作用的相關性，初步證明EPO預處理在LIRI中對肝臟微循環(huán)的保護作用。 方法實驗用45只健康成年雄性SD大鼠，制作大鼠雙后肢缺血再灌注模型。采用隨機數(shù)表法將大鼠平均分為3組（n=15）：對照組（Control組）；缺血再灌注組（IR組）；EPO預處理組（EPO+IR組）。本實驗采用缺血4小時，再灌注2小時的方法。于再灌注前30min對EPO+IR組的大鼠腹腔注射重組人促紅細胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）3000U/kg，Control組和IR組大鼠則腹腔注射等量的生理鹽水。用激光多普勒活體觀察各組大鼠肝臟微循環(huán)血流量改變情況；光學顯微鏡觀察HE染色后的大鼠肝臟組織的形態(tài)變化；檢測血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量；血漿和肝臟組織中超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量；免疫組織化學染色觀察肝臟組織中eNOS的表達情況；蛋白免疫印跡法（Westernblot）檢測肝臟組織中eNOS蛋白的表達水平。 結(jié)果1）激光多普勒活體觀察各組大鼠肝臟微循環(huán)血流量，IR組較Control組肝臟微循環(huán)血流量明顯降低，EPO+IR組肝臟微循環(huán)血流量雖也一定程度上降低，但是明顯高于IR組。提示EPO預處理提高了LIRI后肝臟微循環(huán)血流量。2）HE染色觀察到大鼠肝臟組織，，Control組肝臟組織形態(tài)結(jié)構基本正常，IR組動物肝小葉結(jié)構紊亂，肝血竇變窄，部分肝組織出現(xiàn)肝血竇及中央靜脈不同程度的淤血，炎細胞浸潤等病理改變，EPO+IR組中各種病理改變較IR組減輕。3）與Control組相比，IR組和EPO+IR組血漿中ALT、AST水平均明顯升高（P＜0.01），但EPO+IR組血漿中ALT、AST水平較IR組均有所降低（P＜0.01）。說明EPO預處理組的肝臟功能一定程度上得到了保護。4）與Control組相比，IR組和EPO+IR組的肝臟組織和血漿中SOD活力下降明顯（P＜0.01），MDA含量明顯升高（P＜0.05）。但EPO+IR組較IR組SOD活力升高（P＜0.05），MDA含量降低（P＜0.05）。提示EPO預處理減輕了脂質(zhì)過氧化反應。5）肝臟免疫組織化學染色顯示，IR組和EPO+IR組肝臟組織中均有eNOS蛋白棕黃色染色顆粒（P＜0.01），EPO+IR組較IR組棕黃色染色更為明顯（P＜0.05）。6） Western blot實驗發(fā)現(xiàn)，EPO+IR組肝臟組織中eNOS蛋白表達水平最高，其次是IR組，這兩組中eNOS表達水平均高于Control組，且差異具有顯著的統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。說明EPO在LIRI的肝臟組織中更加促進了eNOS的活化和表達。 結(jié)論EPO預處理可以減輕大鼠LIR肝臟的損傷，其機制可能與減輕缺血再灌注后肝臟微循環(huán)的損傷，抑制肝臟組織內(nèi)的氧化應激反應，上調(diào)eNOS在肝臟組織中的活化和表達有關。當大鼠發(fā)生LIRI時，用EPO預處理可以減輕肝臟組織的病理改變；通過提高SOD活力、降低MDA含量減輕氧化應激反應；促進eNOS的活化，上調(diào)P-eNOS的表達，相對增加肝臟微循環(huán)的血流量。從而發(fā)揮對肝臟微循環(huán)的保護作用。
【關鍵詞】：促紅細胞生成素 缺血再灌注損傷 微循環(huán) 內(nèi)皮型一氧化氮合酶 肝臟
【學位授予單位】：河北聯(lián)合大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 英文縮略表 續(xù)表11-12
• 引言12-14
• 第1章 實驗研究14-50
• 1.1 材料與方法14-26
• 1.1.1 實驗材料14-17
• 1.1.2 實驗方法17-26
• 1.2 結(jié)果26-37
• 1.2.1 各組動物激光多普勒測定肝臟微循環(huán)血流量的比較26
• 1.2.2 HE 染色肝組織病理形態(tài)改變26-29
• 1.2.3 各組動物血漿 AST、ALT 濃度的比較29
• 1.2.4 各組動物血漿 MDA、SOD 值的比較29-32
• 1.2.5 各組動物肝組織 MDA、SOD 值的比較32-33
• 1.2.6 大鼠肝臟組織 eNOS 免疫組化染色結(jié)果分析33-36
• 1.2.7 肝臟組織 eNOS 蛋白 Western-Blot 檢測結(jié)果36-37
• 1.3 討論37-45
• 1.3.1 關于大鼠肢體缺血再灌注模型的建立和肢體的微循環(huán)血流量變化37-38
• 1.3.2 EPO 的的生物學特性及作用38-39
• 1.3.3 EPO 對 LIR 后肝臟微循環(huán)的保護作用及可能機制39-41
• 1.3.4 EPO 對 LIR 后肝臟的保護機制41-45
• 1.4 結(jié)論45
• 1.5 展望45-46
• 參考文獻46-50
• 第2章 綜述內(nèi)皮型一氧化氮合酶對缺血再灌注組織微循環(huán)的影響50-58
• 2.1 一氧化氮及一氧化氮合酶50-51
• 2.2 eNOS 的活化51-53
• 2.2.1 細胞內(nèi) Ca2+和鈣調(diào)蛋白51-52
• 2.2.2 磷酸化52
• 2.2.3 巰基亞硝基化52-53
• 2.3 eNOS 在微循環(huán)中的作用53-55
• 2.3.1 eNOS 對微血管的調(diào)節(jié)53
• 2.3.2 eNOS 與其他細胞因子的相互作用53-54
• 2.3.3 eNOS 與氧化應激反應54-55
• 2.3.4 eNOS 抑制白細胞和血小板的聚集粘附55
• 2.4 小結(jié)55-56
• 參考文獻56-58
• 致謝58-59
• 導師簡介59-60
• 作者簡介60-61
• 學位論文數(shù)據(jù)集61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關鍵詞：EPO預處理對LIR大鼠肝臟微循環(huán)的保護，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：408874