本文關(guān)鍵詞：EPO預(yù)處理對(duì)LIR大鼠肝臟微循環(huán)的保護(hù)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過建立大鼠雙后肢肢體缺血再灌注損傷（1imb Ischemia ReperfusionInjury，LIRI）模型，觀察促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）預(yù)處理對(duì)LIRI后的大鼠肝臟及肝臟微循環(huán)的保護(hù)作用。探究缺血再灌注損傷（IschemiaReperfusion Injury，IRI）后活體的大鼠肝臟微循環(huán)血流量變化、肝臟組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）蛋白含量水平的區(qū)別、氧化應(yīng)激（Oxidative Stress）損傷程度、肝臟組織形態(tài)變化等。探討這一系列變化與EPO對(duì)肝臟微循環(huán)保護(hù)作用的相關(guān)性，初步證明EPO預(yù)處理在LIRI中對(duì)肝臟微循環(huán)的保護(hù)作用。 方法實(shí)驗(yàn)用45只健康成年雄性SD大鼠，制作大鼠雙后肢缺血再灌注模型。采用隨機(jī)數(shù)表法將大鼠平均分為3組（n=15）：對(duì)照組（Control組）；缺血再灌注組（IR組）；EPO預(yù)處理組（EPO+IR組）。本實(shí)驗(yàn)采用缺血4小時(shí)，再灌注2小時(shí)的方法。于再灌注前30min對(duì)EPO+IR組的大鼠腹腔注射重組人促紅細(xì)胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）3000U/kg，Control組和IR組大鼠則腹腔注射等量的生理鹽水。用激光多普勒活體觀察各組大鼠肝臟微循環(huán)血流量改變情況；光學(xué)顯微鏡觀察HE染色后的大鼠肝臟組織的形態(tài)變化；檢測(cè)血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量；血漿和肝臟組織中超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量；免疫組織化學(xué)染色觀察肝臟組織中eNOS的表達(dá)情況；蛋白免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)肝臟組織中eNOS蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果1）激光多普勒活體觀察各組大鼠肝臟微循環(huán)血流量，IR組較Control組肝臟微循環(huán)血流量明顯降低，EPO+IR組肝臟微循環(huán)血流量雖也一定程度上降低，但是明顯高于IR組。提示EPO預(yù)處理提高了LIRI后肝臟微循環(huán)血流量。2）HE染色觀察到大鼠肝臟組織，，Control組肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，IR組動(dòng)物肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝血竇變窄，部分肝組織出現(xiàn)肝血竇及中央靜脈不同程度的淤血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變，EPO+IR組中各種病理改變較IR組減輕。3）與Control組相比，IR組和EPO+IR組血漿中ALT、AST水平均明顯升高（P＜0.01），但EPO+IR組血漿中ALT、AST水平較IR組均有所降低（P＜0.01）。說明EPO預(yù)處理組的肝臟功能一定程度上得到了保護(hù)。4）與Control組相比，IR組和EPO+IR組的肝臟組織和血漿中SOD活力下降明顯（P＜0.01），MDA含量明顯升高（P＜0.05）。但EPO+IR組較IR組SOD活力升高（P＜0.05），MDA含量降低（P＜0.05）。提示EPO預(yù)處理減輕了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。5）肝臟免疫組織化學(xué)染色顯示，IR組和EPO+IR組肝臟組織中均有eNOS蛋白棕黃色染色顆粒（P＜0.01），EPO+IR組較IR組棕黃色染色更為明顯（P＜0.05）。6） Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，EPO+IR組肝臟組織中eNOS蛋白表達(dá)水平最高，其次是IR組，這兩組中eNOS表達(dá)水平均高于Control組，且差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說明EPO在LIRI的肝臟組織中更加促進(jìn)了eNOS的活化和表達(dá)。 結(jié)論EPO預(yù)處理可以減輕大鼠LIR肝臟的損傷，其機(jī)制可能與減輕缺血再灌注后肝臟微循環(huán)的損傷，抑制肝臟組織內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，上調(diào)eNOS在肝臟組織中的活化和表達(dá)有關(guān)。當(dāng)大鼠發(fā)生LIRI時(shí)，用EPO預(yù)處理可以減輕肝臟組織的病理改變；通過提高SOD活力、降低MDA含量減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)；促進(jìn)eNOS的活化，上調(diào)P-eNOS的表達(dá)，相對(duì)增加肝臟微循環(huán)的血流量。從而發(fā)揮對(duì)肝臟微循環(huán)的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：促紅細(xì)胞生成素 缺血再灌注損傷 微循環(huán) 內(nèi)皮型一氧化氮合酶 肝臟
【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 英文縮略表 續(xù)表11-12
• 引言12-14
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究14-50
• 1.1 材料與方法14-26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-26
• 1.2 結(jié)果26-37
• 1.2.1 各組動(dòng)物激光多普勒測(cè)定肝臟微循環(huán)血流量的比較26
• 1.2.2 HE 染色肝組織病理形態(tài)改變26-29
• 1.2.3 各組動(dòng)物血漿 AST、ALT 濃度的比較29
• 1.2.4 各組動(dòng)物血漿 MDA、SOD 值的比較29-32
• 1.2.5 各組動(dòng)物肝組織 MDA、SOD 值的比較32-33
• 1.2.6 大鼠肝臟組織 eNOS 免疫組化染色結(jié)果分析33-36
• 1.2.7 肝臟組織 eNOS 蛋白 Western-Blot 檢測(cè)結(jié)果36-37
• 1.3 討論37-45
• 1.3.1 關(guān)于大鼠肢體缺血再灌注模型的建立和肢體的微循環(huán)血流量變化37-38
• 1.3.2 EPO 的的生物學(xué)特性及作用38-39
• 1.3.3 EPO 對(duì) LIR 后肝臟微循環(huán)的保護(hù)作用及可能機(jī)制39-41
• 1.3.4 EPO 對(duì) LIR 后肝臟的保護(hù)機(jī)制41-45
• 1.4 結(jié)論45
• 1.5 展望45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 第2章 綜述內(nèi)皮型一氧化氮合酶對(duì)缺血再灌注組織微循環(huán)的影響50-58
• 2.1 一氧化氮及一氧化氮合酶50-51
• 2.2 eNOS 的活化51-53
• 2.2.1 細(xì)胞內(nèi) Ca2+和鈣調(diào)蛋白51-52
• 2.2.2 磷酸化52
• 2.2.3 巰基亞硝基化52-53
• 2.3 eNOS 在微循環(huán)中的作用53-55
• 2.3.1 eNOS 對(duì)微血管的調(diào)節(jié)53
• 2.3.2 eNOS 與其他細(xì)胞因子的相互作用53-54
• 2.3.3 eNOS 與氧化應(yīng)激反應(yīng)54-55
• 2.3.4 eNOS 抑制白細(xì)胞和血小板的聚集粘附55
• 2.4 小結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 致謝58-59
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介59-60
• 作者簡(jiǎn)介60-61
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：408874