本文關(guān)鍵詞：腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ（AC3）在非神經(jīng)細胞中定位的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：cAMP作為細胞內(nèi)最重要的第二信使之一，調(diào)節(jié)細胞的許多生物學功能，包括卵子發(fā)生、胚胎發(fā)育、幼體發(fā)育、荷爾蒙分泌、糖代謝、平滑肌收縮、心臟收縮、嗅覺、學習以及記憶等。 腺苷酸環(huán)化酶(AC)是cAMP信號轉(zhuǎn)導通路的重要組分，其主要作用是催化ATP生成cAMP。AC3是AC家族中的第3個成員，它是已分離、鑒定的其中9個膜整合蛋白之一。研究發(fā)現(xiàn)AC3不僅表達于小鼠海馬區(qū)、下丘腦和嗅覺表皮組織等部位的神經(jīng)細胞纖毛，還廣泛存在于脊髓、腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì)、心房肌、主動脈平滑肌、肺、腎、胰島、睪丸和卵巢等多種組織器官，并與多種生理功能密切相關(guān)。 纖毛是突出于真核細胞表面的、以微管為結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的“毛發(fā)狀”細胞器，它能感知細胞外機械和化學信號刺激。纖毛分為兩大類：運動纖毛和不動纖毛，不動纖毛即初級纖毛，它普遍存在于多種生物的各種類型細胞表面。初級纖毛上含有多種特異受體、離子通道蛋白和信號轉(zhuǎn)導蛋白等。近年發(fā)現(xiàn)初級纖毛參與了細胞內(nèi)信號傳導等多種細胞生物學過程，對動物的發(fā)育調(diào)控及維持各個組織器官正常生理功能具有重要作用。 盡管AC3表達在多種非神經(jīng)細胞中并具有重要的生理功能，但它在這些非神經(jīng)細胞的表達部位，尚待確定。本研究旨在明確AC3在這些非神經(jīng)細胞中的表達情況以及表達部位。 本論文以大鼠嗜鉻細胞瘤PC12、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞U251、小鼠腎內(nèi)髓集合管上皮細胞IMCD3、人腎上皮細胞293T、骨髓基質(zhì)干細胞BMSCs、成骨細胞OB、人宮頸癌細胞HeLa和人肺癌細胞A549為研究材料。研究的內(nèi)容主要分為2個部分： 第一部分通過RT-PCR技術(shù)對細胞的AC3基因mRNA表達水平進行半定量，PCR產(chǎn)物DNA測序，所得序列用生物學軟件DNAMAN6．0分別將人和鼠的AC3基因cDNA進行比對分析。 第二部分：運用細胞免疫熒光染色，對PC12、U251、IMCD3、293T、OB和BMSC以及A549和HeLa細胞中AC3的表達部位進行確定。 研究結(jié)果如下： 1、以AC3基因的特異性引物，，擴增并檢測AC3基因在相關(guān)細胞中有擴增產(chǎn)物，對PCR產(chǎn)物測序并進行比對分析顯示，這些細胞中均有AC3基因的內(nèi)源性表達。 2、免疫熒光染色結(jié)果顯示PC12和U251細胞株中均發(fā)現(xiàn)了陽性標記的AC3抗體，并與纖毛標記抗體Acetylated α-Tubulin染色發(fā)生重疊。小鼠IMCD3細胞株和人腎組織的293T細胞中大多細胞具有初級纖毛亞結(jié)構(gòu)，且AC3亞定位于該細胞的纖毛部位，在這兩種腎細胞中， AC3表達于初級纖毛。BMSC細胞中能直觀地觀察到AC3亞定位于初級纖毛上。在A549細胞中AC3陽性結(jié)果與初級纖毛標記物Acetylated α-Tubulin陽性結(jié)果完全重合，且AC3沿著初級纖毛軸絲分布；在HeLa細胞中初級纖毛與AC3的分布情況類似于A549細胞中的結(jié)果。雖然OB細胞中也有陽性AC3呈顆粒狀紅色熒光，但AC3與初級纖毛并不存在共定位關(guān)系。 結(jié)論： 1、AC3基因內(nèi)源性表達于PC12、U251、IMCD3、293T、BMSCs、OB、HeLa和A549細胞。 2、AC3表達于神經(jīng)細胞初級纖毛，并可以作為神經(jīng)細胞初級纖毛的標志物。 3、除OB細胞外，AC3也定位在檢測的5種非神經(jīng)細胞纖毛中。
【關(guān)鍵詞】：酶腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ 初級纖毛 RT-PCR 免疫熒光 定位
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R3416;Q78
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 引言12-14
• 第1章 文獻綜述14-27
• 1.1 腺苷酸環(huán)化酶（AC）14-16
• 1.1.1 腺苷酸環(huán)化酶（AC）簡介14-15
• 1.1.2 腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ（AC3）分布和功能15-16
• 1.2 細胞纖毛16-22
• 1.2.1 細胞纖毛的結(jié)構(gòu)16-18
• 1.2.2 纖毛的功能18-20
• 1.2.3 纖毛相關(guān)疾病20-22
• 1.3 纖毛介導的 CAMP 和 Hh 信號通路22-25
• 1.3.1 cAMP 信號通路23-24
• 1.3.2 Hedgehog 信號通路24-25
• 1.4 立項依據(jù)25-27
• 第2章 RT-PCR 檢測 AC3 在各種細胞中的表達情況27-43
• 2.1 實驗材料27-31
• 2.1.1 儀器27
• 2.1.2 試劑和溶液27-30
• 2.1.3 細胞類型30-31
• 2.1.4 耗材31
• 2.2 方法31-38
• 2.2.1 原代骨髓基質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)31-32
• 2.2.2 成骨細胞的原代分離培養(yǎng)32
• 2.2.3 細胞系傳代32-33
• 2.2.4 細胞的凍存與復蘇33-34
• 2.2.5 總 RNA 提取34
• 2.2.6 反轉(zhuǎn)錄34-36
• 2.2.7 RT-PCR36-37
• 2.2.8 核苷酸序列分析37-38
• 2.3 結(jié)果38-41
• 2.3.1 明場下觀察骨髓間充質(zhì)干細胞生長狀態(tài)38
• 2.3.2 明場下觀察成骨細胞形態(tài)38
• 2.3.3 總 RNA 提取38-39
• 2.3.4 AC3 基因在多種類型細胞中表達39-41
• 2.4 討論41-43
• 第3章 腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ(AC3)在多種細胞中的定位43-55
• 3.1 實驗材料43-44
• 3.1.1 儀器43
• 3.1.2 試劑43
• 3.1.3 溶液43-44
• 3.2 實驗方法44-45
• 3.2.1 纖毛誘導及免疫熒光染色44-45
• 3.3 實驗結(jié)果45-52
• 3.3.1 AC3 在神經(jīng)細胞初級纖毛的定位45-46
• 3.3.2 AC3 在非神經(jīng)細胞初級纖毛的表達46-50
• 3.3.3 AC3 在癌細胞初級纖毛中的定位50-52
• 3.4 討論52-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻56-67
• 致謝67-68
• 讀研期間發(fā)表的論文68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張海龍;黃朝梁;;骨保護素的研究進展[J];中華醫(yī)學雜志;2006年31期

2 ;SPARCL1, Shp2, MSH2, E-cadherin, p53, ADCY-2 and MAPK are prognosis-related in colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2011年15期

  本文關(guān)鍵詞：腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ（AC3）在非神經(jīng)細胞中定位的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：408780