目的研究Nac-1在神經(jīng)干/祖細(xì)胞(NSPCs)自我更新維持中的作用及其機(jī)制。方法以胚胎干細(xì)胞(ESCs)來源的NSPCs為細(xì)胞模型,利用RNA干擾法敲低Nac-1表達(dá)并通過定量RT-PCR和Western blot檢測干擾效率;通過細(xì)胞計數(shù)和流式細(xì)胞技術(shù),檢測NSPCs的增殖和凋亡情況;并利用熒光素酶等實驗檢測Nac-1對c-Myc的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果 Nac-1在NSPCs中高表達(dá),分化后其mRNA水平下降了77%。與對照組相比,實驗組(干擾組)NSPCs中Nac-1的mRNA水平顯著下降,干擾效率分別是69%和66%。Nac-1敲低組的NSPCs增殖緩慢,凋亡增多,趨向于分化,c-Myc的mRNA水平降低46%和57%。熒光素酶分析顯示,Nac-1敲低組中,c-Myc啟動子的活性下降了24%和36%,提示Nac-1可以調(diào)節(jié)c-Myc基因的啟動子活性。結(jié)論Nac-1促進(jìn)NSPCs增殖并抑制其分化,是NSPCs自我更新維持所必需;Nac-1促自我更新的作用可能通過調(diào)控c-Myc的轉(zhuǎn)錄而實現(xiàn)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 質(zhì)粒構(gòu)建
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
    1.4 定量RT-PCR和Western blot檢測
    1.5 細(xì)胞增殖曲線
    1.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
    1.7熒光素酶分析
    1.8 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 Nac-1在NSPCs中高表達(dá)并隨著NSPCs的分化而下降
    2.2 Nac-1的敲低效果觀察及其對NSPCs增殖的影響
    2.3 Nac-1敲低對NSPCs分化潛能的影響
    2.4 Nac-1對c-Myc的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用
3 討論



本文編號：3859350