發(fā)布時(shí)間：2023-10-30 17:19

　　為了實(shí)現(xiàn)布魯氏菌BP26蛋白在原核宿主細(xì)胞進(jìn)行高效表達(dá),對(duì)布魯氏菌BP26基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化,化學(xué)合成了BP26全基因,并將其克隆至pET30a(+)載體上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a(+)-bp26,轉(zhuǎn)化至基因工程菌BL21(DE3),利用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。利用His-tag鎳柱純化BP26重組蛋白,并對(duì)純化后的重組蛋白進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示:重組質(zhì)粒經(jīng)Nde I與Xhol I雙酶切,酶切產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳顯示與目的產(chǎn)物條帶大小一致;當(dāng)誘導(dǎo)條件為IPTG濃度1 mmol/L,37℃誘導(dǎo)8 h時(shí),重組蛋白的表達(dá)量最高;純化后的目的蛋白經(jīng)過Western Blot鑒定,顯示在27. 8 kD左右有一條明顯的蛋白印跡條帶,與預(yù)期大小相符。本研究成功實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌高效表達(dá)BP26蛋白,為后續(xù)布病檢測(cè)新試劑的研制及疫苗的研發(fā)奠定了生物學(xué)基礎(chǔ)。

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 序列分析、合成
    1.4 p ET30a(+)-BP26重組載體的酶切鑒定
    1.5 重組載體的轉(zhuǎn)化
    1.6 p ET30a(+)-BP26重組蛋白的表達(dá)與鑒定
    1.7 p ET30a(+)-BP26重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)條件篩選
    1.8 p ET30a(+)-BP26蛋白的大量表達(dá)及純化
    1.9 重組蛋白p ET30a(+)-BP26的Western Blot鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 酶切結(jié)果
    2.2 重組蛋白p ET30a(+)-BP26的誘導(dǎo)表達(dá)鑒定
    2.3 重組蛋白p ET30a(+)-BP26誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
    2.4 目的蛋白p ET30a(+)-BP26的純化以及SDS-PAGE鑒定
    2.5 目的蛋白p ET30a-BP26的Western Blot鑒定
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