目的分離人胚胎紋狀體組織的神經(jīng)干/祖細(xì)胞,運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)上清液作為凍存液和貼壁法培養(yǎng)擴(kuò)增、合理的凍存密度及有效的復(fù)蘇時(shí)間,在體外建立穩(wěn)定培養(yǎng)、保存體系,給中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供技術(shù)支持。方法將來源于胚胎的紋狀體神經(jīng)干/祖細(xì)胞,利用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增。采用細(xì)胞培養(yǎng)上清液作為凍存液,凍存密度為5×10⁶/ml²⁵×10⁷/ml,分別復(fù)蘇凍存1、3、6個(gè)月的細(xì)胞各3支,并用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù),計(jì)算細(xì)胞存活率。將此細(xì)胞傳代培養(yǎng)p3、p9、p15、p21,用Nestin免疫組化進(jìn)行化學(xué)染色鑒定。結(jié)果應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法細(xì)胞能夠穩(wěn)定傳代p21以上,凍存1、3、6個(gè)月后,細(xì)胞存活率可達(dá)87%左右,仍然保持生長分化能力,Nestin表達(dá)陽性率為85%以上。結(jié)論本方法培養(yǎng)人胚胎紋狀體神經(jīng)干/祖細(xì)胞能傳代擴(kuò)增、低溫保存,為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病細(xì)胞治療研究提供技術(shù)依據(jù)。 

【文章來源】：解剖科學(xué)進(jìn)展. 2015,21(06)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 組織材料
    1.2 試劑與設(shè)備
    1.3 組織處理與原代細(xì)胞培養(yǎng)
    1.4 細(xì)胞傳代
    1.5 神經(jīng)干/祖細(xì)胞的生長曲線
    1.6 神經(jīng)干/祖細(xì)胞的凍存
    1.7 免疫組化化學(xué)染色鑒定
2 結(jié)果
    2.1 神經(jīng)干/祖細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
    2.2 神經(jīng)干/祖細(xì)胞的生長曲線
    2.3 神經(jīng)干/祖細(xì)胞的復(fù)蘇和計(jì)數(shù)細(xì)胞存活率
    2.4 神經(jīng)干/祖細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色
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