目的探討mi R-93-5p是否通過靶向調(diào)控其預(yù)測靶基因Smad5的表達(dá),從而抑制小鼠MSCs C3H10T1/2細(xì)胞的成骨分化。方法構(gòu)建Smad5 3’-UTR-熒光素酶報(bào)告載體（pmi R-RB-REPORTTM）,通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測,觀察mi R-93-5p對Smad5 3’-UTR熒光素酶活性的影響,鑒定Smad5是否為mi R-93-5p的靶基因。將mi R-93-5p mimics（M組）與mi R-93-5p inhibitor（In組）及其對應(yīng)的陰性對照組mi R-93-5p mimics陰性對照（MC組）與mi R-93-5p inhibitor陰性對照（In C組）分別轉(zhuǎn)染至C3H10T1/2細(xì)胞中,并進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng),48 h后分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR）及Western blot檢測各組細(xì)胞Smad5在m RNA及蛋白水平的相對表達(dá)量;14 d后通過茜素紅染色檢測各組細(xì)胞外鈣鹽的沉積情況,了解mi R-93-5p對C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化的調(diào)控效應(yīng)。結(jié)果... 

【文章來源】：中國修復(fù)重建外科雜志. 2015,29(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1主要試劑及儀器
    1.2細(xì)胞培養(yǎng)與成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)
    1.3靶基因鑒定實(shí)驗(yàn)
    1.4功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
    1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2結(jié)果
    2.1C3H10T1/2細(xì)胞成骨誘導(dǎo)效果檢測
    2.2靶基因鑒定
    2.3功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]調(diào)控成骨細(xì)胞分化及骨形成關(guān)鍵信號通路的研究進(jìn)展[J]. 徐練,孔清泉.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2014(12)
[2]小鼠干細(xì)胞成骨和成軟骨分化特異性微小RNA的初步研究[J]. 幸?guī)V,孔清泉,項(xiàng)舟,楊婧,羅靜聰,鄧力,解慧琪.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2014(08)
[3]The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J]. Wenwen Jia,Wen Chen,Jiuhong Kang.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2013(05)
[4]微小RNA-451靶向調(diào)節(jié)鈣結(jié)合蛋白39對MSCs成骨分化的促進(jìn)效應(yīng)[J]. 康夏,康菲,楊波,郭洪峰,權(quán)毅,董世武.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2013(09)



本文編號：3086946