目的:觀察炎癥小體NALP3在脂多糖（LPS）激活的腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGCs）中的作用以及短雙歧桿菌的干預(yù)作用。方法:采用LPS激活腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的體外腸道炎癥模型,造模后采用短雙歧桿菌上清液干預(yù)。實(shí)驗(yàn)分組:空白組、炎癥模型組（LPS干預(yù)組5 mg/孔）、短雙歧桿菌干預(yù)組（MOI 1:40=上清液105μL/5×105cells）,采用免疫熒光檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）及炎癥小體NALP3的表達(dá),PCR及Western blot分別檢測(cè)NALP3,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase-1）,白介素1β（IL-1β）,轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）的RNA和蛋白的變化。結(jié)果:免疫熒光顯示腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在LPS激活后表達(dá)GFAP、NALP3,而空白組僅表達(dá)GFAP; RTPCR及Western blot顯示腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在LPS激活后較空白組高表達(dá)NALP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB RNA和蛋白,而短雙歧桿菌干預(yù)組較腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞LPS刺激炎癥模型組明顯下調(diào)NALP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB RNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)論:腸神經(jīng)膠... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)科急危重癥雜志. 2019,25(04)

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組中NALP3蛋白的表達(dá)

GCs經(jīng)LPS刺激后GFAP、NALP3的表達(dá)表23組中NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB分子的ＲNA表達(dá)(x－±s)組別NALP3Caspase-1IL-1βNF-κB空白組0．86±0．100．22±0．030．57±0．070．90±0．10LPS干預(yù)組2．46±0．35*0．51±0．07*1．26±0．07*2．43±0．32*短雙歧桿菌干預(yù)組1．06±0．20#0．24±0．04#0．83±0．03#1．13±0．11#注:與空白組比較，*P＜0．05;與LPS干預(yù)組比較，#P＜0．05圖23組中NALP3蛋白的表達(dá)圖33組中Caspase-1蛋白的表達(dá)圖43組中IL-1β蛋白的表達(dá)圖53組中NF-κB蛋白的表達(dá)炎癥小體被多種刺激物激活，負(fù)責(zé)釋放促炎癥細(xì)胞因子［11］。一旦NALP3炎癥體被激活，促天冬氨酸酶-1轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚詂aspase-1，并進(jìn)一步將白介素-1β(pro-IL-1β)前體轉(zhuǎn)化為常見(jiàn)的促炎細(xì)胞因子IL-1β，NLＲP3炎癥小體的激活可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，參與天然免疫和炎癥反應(yīng)［12］。在本實(shí)驗(yàn)中，采用免疫熒光檢測(cè)EGCs在LPS刺激后高表達(dá)GFAP及NALP3，而未被刺激的EGCs僅表達(dá)GFAP(EGCs經(jīng)典標(biāo)記物)，未表達(dá)NALP3，提示炎性刺激激活EGCs的同時(shí)，也激活NALP3的表達(dá)。采用PCＲ及Westenblot檢測(cè)EGCs不同分組NALP3以及促炎癥蛋白酶Caspase-1，白介素因子IL-1β，NF-κB信號(hào)通路的表達(dá)。LPS激活的EGCs與未予以炎性刺激的的EGCs比較，上調(diào)NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB的表達(dá)，顯示在被活化的EGCs網(wǎng)絡(luò)，炎癥小體NALP3被激活，并招募和激活促炎癥蛋白酶Cas

表達(dá)表23組中NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB分子的ＲNA表達(dá)(x－±s)組別NALP3Caspase-1IL-1βNF-κB空白組0．86±0．100．22±0．030．57±0．070．90±0．10LPS干預(yù)組2．46±0．35*0．51±0．07*1．26±0．07*2．43±0．32*短雙歧桿菌干預(yù)組1．06±0．20#0．24±0．04#0．83±0．03#1．13±0．11#注:與空白組比較，*P＜0．05;與LPS干預(yù)組比較，#P＜0．05圖23組中NALP3蛋白的表達(dá)圖33組中Caspase-1蛋白的表達(dá)圖43組中IL-1β蛋白的表達(dá)圖53組中NF-κB蛋白的表達(dá)炎癥小體被多種刺激物激活，負(fù)責(zé)釋放促炎癥細(xì)胞因子［11］。一旦NALP3炎癥體被激活，促天冬氨酸酶-1轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚詂aspase-1，并進(jìn)一步將白介素-1β(pro-IL-1β)前體轉(zhuǎn)化為常見(jiàn)的促炎細(xì)胞因子IL-1β，NLＲP3炎癥小體的激活可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，參與天然免疫和炎癥反應(yīng)［12］。在本實(shí)驗(yàn)中，采用免疫熒光檢測(cè)EGCs在LPS刺激后高表達(dá)GFAP及NALP3，而未被刺激的EGCs僅表達(dá)GFAP(EGCs經(jīng)典標(biāo)記物)，未表達(dá)NALP3，提示炎性刺激激活EGCs的同時(shí)，也激活NALP3的表達(dá)。采用PCＲ及Westenblot檢測(cè)EGCs不同分組NALP3以及促炎癥蛋白酶Caspase-1，白介素因子IL-1β，NF-κB信號(hào)通路的表達(dá)。LPS激活的EGCs與未予以炎性刺激的的EGCs比較，上調(diào)NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB的表達(dá)，顯示在被活化的EGCs網(wǎng)絡(luò)，炎癥小體NALP3被激活，并招募和激活促炎癥蛋白酶Caspase-1�；罨腃aspase-1切割


本文編號(hào)：3008722