為了克服鼠源性單克隆抗體應用于人體時所出現(xiàn)的嚴重過敏反應，人源化抗體應運而生，并很快成為十余年來國內(nèi)外生物醫(yī)學研究的重大熱點之一。12F6是我所自制的抗人CD3的小鼠單克隆抗體，實驗發(fā)現(xiàn)它競爭抑制OKT3、SK7及UCHT1等CD3單抗與抗原的結合并具有與OKT3相似的激活及抑制T細胞的功能，提示12F6有可能作為免疫抑制劑應用于急性移植排斥反應的治療。但作為小鼠雜交瘤技術生產(chǎn)的抗體，12F6同OKT3一樣存在鼠源抗體應用于人體時可能產(chǎn)生的一系列問題。因此，我們計劃對12F6進行人源化改造，期望獲得一個即保留高親和力，免疫原性又大大下降的人源化抗體。首先采用5’RACE技術獲得了12F6的可變區(qū)全長序列，在確定了12F6可變區(qū)中CDR區(qū)和FR區(qū)的范圍之后，我們將CDR區(qū)直接移植到人源抗體模板的FR中，將獲得的人源化輕、重鏈抗體基因克隆到表達載體共轉染COS細胞，用流式細胞術測定其抗原結合活性，結果發(fā)現(xiàn)這個人源化抗體的親和力基本完全喪失。為了重建人源化抗體的親和力，我們對可能影響抗體親和力的FR區(qū)重要殘基進行回復突變分析。經(jīng)過活性篩選，我們發(fā)現(xiàn)對于人源化重鏈來說，框架區(qū)殘基6，23，24... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抗人CD3單抗12F6可變區(qū)基因的克隆
    1. 實驗材料
    2. 實驗方法
    3. 實驗結果
    4. 討論
第二部分 12F6人源化抗體的表達與篩選
    1. 實驗材料
    2. 實驗方法
    3. 實驗結果
    4. 討論
第三部分 12F6人源化抗體的生物學功能檢測
    1. 實驗材料
    2. 實驗方法
    3. 實驗結果
    4. 討論
小結
參考文獻
縮略詞
綜述
致謝



本文編號：3008687