1．抗肝癌重組單鏈Fv段-免疫毒素（m／hseFv25-TNFα）的表達(dá)、純化及導(dǎo)向研究 將抗肝癌重組單鏈Fv段-免疫毒素（pGEX 4T-1 m／hscFv25-TNFα）在大腸桿菌JM109中以IPTG誘導(dǎo)進(jìn)行表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物為包涵體形式，溶解和折疊后，以GST親合層析色譜純化。間接免疫熒光染色表明m／hscFv25-TNFα的特異性和親和力與親本抗體HAb25相比沒(méi)有明顯下降。MTT實(shí)驗(yàn)提示在放線菌素D存在的情況下，體外m／hscFv25-TNFα對(duì)靶細(xì)胞SMMC-7721有明顯的細(xì)胞毒作用；如無(wú)放線菌素D，靶細(xì)胞SMMC-7721則對(duì)m／hscFv25-TNFα不敏感。荷肝癌裸鼠體內(nèi)的抑瘤實(shí)驗(yàn)顯示m／hscFv25-TNFα對(duì)荷肝癌裸鼠體內(nèi)直徑2～4mm左右的腫瘤具有一定的導(dǎo)向殺傷作用，實(shí)驗(yàn)組14只裸鼠中3只部分緩解，4只完全消失，5只處于靜止?fàn)顟B(tài)。而TNFα對(duì)照組無(wú)完全緩解。我們的結(jié)果提示TNFα對(duì)靶細(xì)胞SMMC-7721的殺傷作用不是直接的，必須依賴于體內(nèi)的某些機(jī)制，可能TNFα是通過(guò)作用于血管肉皮細(xì)胞，或通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，或體內(nèi)某些物質(zhì)起到了放線菌素D、谷胱甘肽或... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

mscFv25一TNFa的誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物及純化產(chǎn)物的SDS一PAGE從左到右:純化產(chǎn)物，誘導(dǎo)宿主菌，未誘導(dǎo)宿主菌，marker

圖3mseFv25一TNFa的免疫熒光染色4.m/hscFv25一TNFa的MTT實(shí)臉M下丁實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，靶細(xì)胞S(MMC一7721)對(duì)mscFv25一-NTF以和TNF如勺細(xì)胞毒作用不敏感。但在終濃度為5雌/ml的放線菌素D存在的情況下，對(duì)肝癌細(xì)胞7721有明顯的細(xì)胞毒作用。5·m/hseFv一TNFa的導(dǎo)向治療在劑量為253協(xié)留kg時(shí)，hahscFv25一NTF。組中有4只裸鼠的移植瘤完全消失，3只部分緩解，5只處于靜止?fàn)顟B(tài)。NTFa組均為增大，無(wú)全消失。對(duì)照組腫瘤呈持續(xù)生長(zhǎng)，14天后達(dá)1.0cm3，表明耐hsFcv25-TNFa具有一定的導(dǎo)向治療作用。各實(shí)驗(yàn)組肝、肺組織活檢未見(jiàn)轉(zhuǎn)移。。

markernon一redueedredueedsFv一TNFa，分別經(jīng)非還原上樣緩沖淑no和還原上樣緩沖和rdeucdebueff)r性及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的目的是先讓有導(dǎo)向活性的SeFv-TNMc一7721結(jié)合，未吸附的(無(wú)導(dǎo)向活性合刊F咖勺細(xì)胞毒活性，從而間接檢測(cè)7.1.2則在終濃度為5雌/ml的放線菌素a和dsFy.INF。對(duì)靶細(xì)胞SMMC一7721得結(jié)果相似，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)線性擬合方明在終濃度為5、歲ml放線菌素D


本文編號(hào)：2983588