白色念珠菌是條件致病菌,形成生物膜后耐藥性增加,從放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中獲得能抑制生物膜形成的蛋白有一定應(yīng)用前景。采用硫酸銨鹽析法提取發(fā)酵液中的粗蛋白;微孔板半定量法檢測(cè)菌株TRM43355發(fā)酵液粗提物、粗蛋白及不同理化因素處理后的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響。結(jié)果顯示,菌株TRM 43355的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成具有很好的抑制效果,蛋白濃度為2 mg/mL時(shí)抑制白色念珠菌生物膜形成效果最好,其抑制率可達(dá)92%以上。蛋白耐酸,但不耐高溫,80℃以上的高溫蛋白失活。經(jīng)有機(jī)溶劑和金屬離子處理后的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜的抑制率都有所提高。菌株TRM43355發(fā)酵液中的蛋白具有較強(qiáng)抑制生物膜活性。 

【文章來(lái)源】：塔里木大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,31(03)

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菌株TRM43355基于16SrRNA基因序列鄰接法系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹(shù)

第3期1.5數(shù)據(jù)處理與分析以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示以減少結(jié)果誤差，使用軟件Graphpadprism5進(jìn)行繪圖分析。2結(jié)果與分析2.1菌株TRM43355分類學(xué)鑒定TRM43355經(jīng)過(guò)16SrRNA基因序列比對(duì)分析結(jié)果表明此菌株屬于鏈霉菌屬，與數(shù)據(jù)庫(kù)中StreptomycesbarkulensisRC1831T具有最高相似性，相似度為99.06%。與其它鏈霉菌屬種親緣關(guān)系如圖1所示。圖1菌株TRM43355基于16SrRNA基因序列鄰接法系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹(shù)2.2發(fā)酵液不同組分及粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響使用微孔板半定量法檢測(cè)發(fā)酵液的提取物對(duì)白色念珠菌ATCC64550生物膜形成的影響。如圖2所示，菌株TRM43355的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成具有很好的抑制效果，抑制率高達(dá)88.12%，其70%、95%甲醇洗脫分子的活性也比較顯著。后續(xù)實(shí)驗(yàn)就放線菌TRM43355發(fā)酵液中的粗蛋白深入研究。圖2菌株TRM43355發(fā)酵液提取物對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響袁琳琳等：TRM43355放線菌中蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響15

31%、82.98%和86.89%，當(dāng)?shù)鞍诐舛葹?mg/mL、2.5mg/mL和3mg/mL時(shí)相對(duì)生物膜形成能力分別為6.48%、7.71%和7.75%；蛋白濃度為0.25mg/mL、0.5mg/mL和1mg/mL時(shí)幾乎不能達(dá)到抑制生物膜的效果，蛋白濃度為2mg/mL、2.5mg/mL和3mg/mL時(shí)抑制生物膜的效果較好，抑制率可達(dá)90%以上，因此不同的蛋白濃度對(duì)白色念珠菌生物膜形成影響較大，蛋白濃度越高生物膜形成能力越弱，抑制率越強(qiáng)；濃度為2mg/mL的蛋白濃度為最佳，繼而后續(xù)活性測(cè)試都采用蛋白濃度為2mg/mL。圖3不同濃度粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響2.4粗蛋白經(jīng)過(guò)不同理化因素處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響2.4.1粗蛋白經(jīng)不同pH處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響實(shí)驗(yàn)為探討不同pH處理后的蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響，用不同pH處理蛋白，并進(jìn)行活性檢測(cè)，pH值為7時(shí)處理的蛋白為未處理組，結(jié)果如圖4所示，當(dāng)?shù)鞍譸H值為3時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為6.57%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為5時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為22.9%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為7時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為39.79%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為9時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為12.74%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為11時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為19.58%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)不同pH處理的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物形成能力的影響并不大，pH值為3時(shí)生物膜形成能力最差，其抑制白色念珠菌生物膜的活性最好，pH值為9時(shí)次之。圖4pH對(duì)粗蛋白抑制白色念珠菌生物膜形成能力的影響2.4.2粗蛋白經(jīng)不同溫度處理后對(duì)抑制白色念珠菌生物膜形成的影響實(shí)驗(yàn)為探討溫度對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響，把溫度-20℃設(shè)為未處理

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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