目的通過制造大鼠肝臟缺血再灌注損傷合并大范圍肝切除模型,探討將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）與骨髓內(nèi)皮前體細(xì)胞（BM-EPCs）分別經(jīng)門靜脈移植入模型肝內(nèi),觀察其對于鼠肝臟缺血再灌注肝損傷修復(fù)和肝臟再生中的作用,以及將兩種細(xì)胞聯(lián)合移植觀察兩種細(xì)胞是否存在協(xié)同作用促進肝臟缺血再灌注損傷修復(fù)和肝臟再生。方法通過細(xì)胞貼壁法從骨髓液中獲得BM-MSCs和BM-EPCs。利用慢病毒攜帶綠色熒光蛋白（GFP）及紅色熒光蛋白（RFP）分別對BM-MSCs及BM-EPCs進行細(xì)胞標(biāo)記,為下一步將細(xì)胞移植入動物體內(nèi)觀察細(xì)胞的分布情況做準(zhǔn)備。制作SD大鼠70%肝缺血再灌注損傷合并大范圍肝切除手術(shù)模型,將SD大鼠隨機分為四組:單獨注射BMMSCs（n=12）、單獨BM-EPCs（n=12）、聯(lián)合注射BM-MSCs+BM-EPCs組（n=12）、單獨注射PBS空白對照組（n=12）,按不同分組進行細(xì)胞移植,分別經(jīng)大鼠門靜脈注射GFP標(biāo)記的BM-MSCs/200μL、RFP標(biāo)記的BM-EPCs/200μL、BM-MSCs+BM-EPCs（BM-MSCs∶BM-EPCs=1∶1）/200μL、對照組注射PBS... 

【文章來源】：石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019,37(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

間充質(zhì)干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞(×100)Fig．1Mesenchymalstemcellsandendothelialprogenitorcells(×100)

第4期雷振，等:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與內(nèi)皮祖細(xì)胞對大鼠大部分肝切除合并缺血再灌注后損傷影響破壞輕微，僅見部分肝細(xì)胞輕度腫脹壞死，肝竇間隙少量紅細(xì)胞淤積，肝小葉的結(jié)構(gòu)細(xì)胞形態(tài)尚可。BM-MSCs+BM-EPCs組肝細(xì)胞條索結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞的細(xì)胞核消失，胞漿均質(zhì)化，細(xì)胞間隙增大，出現(xiàn)較多的炎性細(xì)胞，周圍可見明顯的壞死灶(圖7)。Suzuki法進行分類評分:與對照組比較，BM-MSCs組、BM-EPCs組及BM-MSCs+BM-EPCs組在細(xì)胞移植3d后大鼠肝臟HE染色充血程度、空泡化及壞死明顯減輕(P＜0.05)。且與BM-MSCs+BM-EPCs組相比較，BM-MSCs組與BM-EPCs組肝細(xì)胞充血程度、空泡化及局部壞死也顯著降低(P＜0.05)(圖8a)。圖7各組大鼠肝臟病理組織學(xué)改變HE(×200)Fig．7histopathologicalchangesofliverinratsineachgroupHE(×200)圖8各組HE染色評分及TUNEL法檢測差異統(tǒng)計學(xué)分析Fig．8HEstainingscoreandTUNELassaywerestatisticullyanalyzed2.8TUNEL檢測各組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡情況與對照組比較移植3d后BM-MSCs組、BM-EPCs組及BM-MSCs+BM-EPCs肝內(nèi)細(xì)胞凋亡明顯降低(P＜0.05)。且與BM-MSCs+BM-EPCs組相比較，BM-MSCs組與BM-EPCs肝內(nèi)細(xì)胞凋亡程度明顯降低(P＜0.05)。BM-MSCs組肝內(nèi)細(xì)胞凋亡水平也顯著低于BM-EPCs組(P＜0.05)(圖8b、圖9)。圖9TUNEL檢測各組大鼠肝細(xì)胞凋亡情況Fig．9TUNELwasusedtodetecttheapaptosisofhepatocytesineachgroupofrats305

第4期雷振，等:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與內(nèi)皮祖細(xì)胞對大鼠大部分肝切除合并缺血再灌注后損傷影響破壞輕微，僅見部分肝細(xì)胞輕度腫脹壞死，肝竇間隙少量紅細(xì)胞淤積，肝小葉的結(jié)構(gòu)細(xì)胞形態(tài)尚可。BM-MSCs+BM-EPCs組肝細(xì)胞條索結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞的細(xì)胞核消失，胞漿均質(zhì)化，細(xì)胞間隙增大，出現(xiàn)較多的炎性細(xì)胞，周圍可見明顯的壞死灶(圖7)。Suzuki法進行分類評分:與對照組比較，BM-MSCs組、BM-EPCs組及BM-MSCs+BM-EPCs組在細(xì)胞移植3d后大鼠肝臟HE染色充血程度、空泡化及壞死明顯減輕(P＜0.05)。且與BM-MSCs+BM-EPCs組相比較，BM-MSCs組與BM-EPCs組肝細(xì)胞充血程度、空泡化及局部壞死也顯著降低(P＜0.05)(圖8a)。圖7各組大鼠肝臟病理組織學(xué)改變HE(×200)Fig．7histopathologicalchangesofliverinratsineachgroupHE(×200)圖8各組HE染色評分及TUNEL法檢測差異統(tǒng)計學(xué)分析Fig．8HEstainingscoreandTUNELassaywerestatisticullyanalyzed2.8TUNEL檢測各組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡情況與對照組比較移植3d后BM-MSCs組、BM-EPCs組及BM-MSCs+BM-EPCs肝內(nèi)細(xì)胞凋亡明顯降低(P＜0.05)。且與BM-MSCs+BM-EPCs組相比較，BM-MSCs組與BM-EPCs肝內(nèi)細(xì)胞凋亡程度明顯降低(P＜0.05)。BM-MSCs組肝內(nèi)細(xì)胞凋亡水平也顯著低于BM-EPCs組(P＜0.05)(圖8b、圖9)。圖9TUNEL檢測各組大鼠肝細(xì)胞凋亡情況Fig．9TUNELwasusedtodetecttheapaptosisofhepatocytesineachgroupofrats305

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對小鼠肺臟缺血再灌注損傷的影響[J]. 孫常榮,侯念果,李會,帥訓(xùn)軍,孫明潔,唐玉茹,徐堂文,艾登斌.  中國當(dāng)代醫(yī)藥. 2018(05)
[2]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體減輕肝臟缺血再灌注損傷及機制的初步研究[J]. 馮嘯,陳良,張琪,楊揚,陳規(guī)劃,張英才.  中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2017(04)
[3]間充質(zhì)干細(xì)胞預(yù)處理對肝臟缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 王珣,王帥,施曉雷.  現(xiàn)代醫(yī)學(xué). 2017(05)
[4]兩種示蹤方式的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在促進肝缺血再灌注損傷修復(fù)中的對比研究[J]. 楊青,秦書儉,包翠芬,單偉.  中國臨床解剖學(xué)雜志. 2016(03)
[5]經(jīng)不同方式移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝纖維化的療效[J]. 張雯,陳香宇,何巧玉,王閃,李春燕,段芳齡,黃華.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2013(06)
[6]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對脂肪肝大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 張英才,楊揚,楊卿,劉劍戎,潘國政,張琪,陳規(guī)劃.  中華普通外科雜志. 2011 (03)

碩士論文
[1]血紅素加氧酶-1介導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠急性肝衰竭的機制研究[D]. 張志恒.東南大學(xué) 2016



本文編號：2982591