近年來,隨著超聲技術(shù)的發(fā)展、應(yīng)用以及微泡造影劑研制的進(jìn)展,超聲與微泡造影劑的協(xié)同作用在基因治療、藥物輸送、溶栓治栓、炎癥和腫瘤的靶向顯影與治療等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域顯示了巨大的應(yīng)用潛力,逐漸成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究中的一個(gè)熱點(diǎn)。本研究選用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）、HeLa細(xì)胞作為離體細(xì)胞模型,以EGFP基因作為外源目的基因、核酸熒光染料TO-PROTM-1、PI、DAPI作為模式藥物,分別通過MTT比色分析法、倒置熒光顯微鏡觀察法、流式細(xì)胞檢測技術(shù)、MGG染色法、考馬斯亮藍(lán)染色法研究了20 kHz低頻超聲單獨(dú)和與微泡造影劑聯(lián)合介導(dǎo)EGFP基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞、HeLa細(xì)胞的效率和規(guī)律、超聲與脂質(zhì)體共同介導(dǎo)EGFP基因轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞的效率和規(guī)律、超聲介導(dǎo)模式藥物輸送的效率和規(guī)律以及超聲對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性、生長曲線、遷移能力和細(xì)胞骨架的影響。研究結(jié)果表明:1. 20 kHz低頻超聲能介導(dǎo)EGFP基因轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和HeLa細(xì)胞,但轉(zhuǎn)染率較低,一般在0.2%²%之間;細(xì)胞類型對轉(zhuǎn)染率有影響,HeLa細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率要高于內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率;質(zhì)粒濃度對轉(zhuǎn)染效率有影響,在一定范圍內(nèi)... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pEGFP-N1質(zhì)粒圖譜

圖 2-2 pEGFP-N1 質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定（1） HUVECs 細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定EA.Hy926 細(xì)胞株培養(yǎng)用含 10%新生牛血清、100 U/ml 的青霉素、100 mg/ml鏈霉素、20 mmol/1 HEPES、 2% NaHCO3、 2% HAT、 pH=7.2-7.4 的 RPMI1640全培養(yǎng)基在 37 ℃ , 5% CO2，飽和濕度條件的孵箱里培養(yǎng)。EA.Hy926 細(xì)胞株生長較快，2~3 天換液一次，3~4 天可傳代。EA.Hy926 細(xì)胞株的鑒定分為形態(tài)學(xué)和 vWF因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定，已由細(xì)胞株提供者鑒定。（2） HeLa 細(xì)胞培養(yǎng)HeLa 細(xì)胞株培養(yǎng)用含 10%新生牛血清、100U/ml 的青霉素、100 mg/ml 鏈霉

-3 超聲波細(xì)胞破碎儀 美國 BRANSON S-250圖 2-4 超聲照射示意圖如圖 2-3 和圖圖 2-4 所示。超聲照射頻率為脈沖頻率為 1Hz，9%輸出振幅（輸出功率 頭面積約 0.8 cm2, 輸送功率 3.77 W/ cm變。轉(zhuǎn)染步驟

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]超聲介導(dǎo)脂質(zhì)體微泡對大鼠血管平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究[D]. 張萍.第三軍醫(yī)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]超聲輻照對培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D]. 張俊霞.重慶醫(yī)科大學(xué) 2003



本文編號：2967336