發(fā)布時間：2021-01-08 19:39

　　結核�。╰uberculosis，TB）是由結核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）所致以呼吸道為主的慢性傳染病。目前全球有1/3的人口感染MTB，每年有1000萬的新發(fā)病人和300萬的病人死亡，表明TB仍是影響全球人類健康的一個主要公共衛(wèi)生問題。近年來，耐藥結核分枝桿菌的流行、與HIV的合并感染以及人口流動的增加等因素，進一步加劇了TB對人類的威脅。卡介苗（BCG）是目前TB唯一的預防性疫苗，在發(fā)展中國家廣泛應用，但其保護效果不穩(wěn)定。另外，BCG接種干擾了利用PPD對MTB感染的診斷，接種免疫缺陷病人可能導致播散性感染等缺陷。鑒于BCG自身的不足，以及當前TB流行的嚴重性，研究更有效的疫苗具有重要意義。 基因免疫在包括TB的多種傳染病的動物模型中可引起體液和細胞免疫應答。利用質粒DNA真核表達載體，已經(jīng)有24個MTB抗原被表達，這些抗原主要來自MTB培養(yǎng)濾液蛋白（CFP）。其中有幾個蛋白在動物模型中顯示了較高的保護性，如Ag85復合體、ESAT6、MPT64、Hsp65和PstS3等。因而基因免疫可能是有希望的用于防治TB的一種有效方法。 ... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻回顧
    一、 TB威脅的嚴重程度和新型疫苗研究的意義
    二、 理想的預防TB疫苗的特征
    三、 TB新型疫苗的研究進展
        1) 現(xiàn)有的TB新型疫苗的概況和優(yōu)缺點
        2) 亞單位疫苗
        3) 基因工程重組活疫苗
        4) 減毒活疫苗
        5) 基因疫苗
    四、 展望
研究內容
    第一部分 MTB Ag85B基因真核表達載體的構建和免疫原性研究
        一、 實驗材料
        二、 實驗方法
            1. MTB的培養(yǎng)
            2. MTB基因組DNA的提取
            3. MTB的培養(yǎng)和培養(yǎng)濾液蛋白（CFP）的制備
            4. MTB H37Ra菌株Ag85B基因的擴增、克隆及序列分析
            5. 亞克隆法構建Ag85B基因的真核表達載體
            6. 表達載體的轉化和酶切鑒定
            7. 質粒的大量提取和純化
            8. 轉染CHO細胞
            9. RT-PCR檢測Ag85B成熟蛋白mRNA的表達
            10. 基因免疫
            11. 基因免疫小鼠血清中Ag85B抗體的檢測
        三、 結果
            1. Ag85B基因的PCR擴增結果
            2. Ag85B基因的克隆
            3. MTB H37Ra株Ag85B基因的序列分析
            4. 同源性收索的結果
            5. MTB Ag85B基因的真核表達載體的構建
            6. Ag85B成熟蛋白mRNA在CHO細胞中的表達
            7. Dot blotting檢測結果
            8. 血清Ag85B抗體的滴度
        四、 討論
    第二部分 MTB Ag85B成熟蛋白基因疫苗的細胞免疫反應和保護性的初步研究
        一、 實驗材料
        二、 實驗方法
            1. MTB H37Rv菌株的培養(yǎng)和定量
            2. 基因免疫
            3. 脾臟細胞懸液的制備和單個核細胞的分離與計數(shù)
            4. 抗原特異的脾淋巴細胞增殖實驗
            5. IFNγ的誘生
            6. IFNγ含量的檢測
            7. MTB H37Rv毒株的攻擊實驗
            8. 過繼免疫保護實驗
            9. 脾臟細菌CFU計數(shù)及統(tǒng)計學檢驗
        三、 結果
            1. 脾淋巴細胞增殖實驗
            2. IFNγ的含量
            3. 基因免疫的保護性
            4. 過繼免疫的保護性
        四、 討論
小結
致 謝
參考文獻



本文編號：2965179