發(fā)布時間：2021-01-08 19:39

　　結(jié)核�。╰uberculosis，TB）是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）所致以呼吸道為主的慢性傳染病。目前全球有1/3的人口感染MTB，每年有1000萬的新發(fā)病人和300萬的病人死亡，表明TB仍是影響全球人類健康的一個主要公共衛(wèi)生問題。近年來，耐藥結(jié)核分枝桿菌的流行、與HIV的合并感染以及人口流動的增加等因素，進(jìn)一步加劇了TB對人類的威脅。卡介苗（BCG）是目前TB唯一的預(yù)防性疫苗，在發(fā)展中國家廣泛應(yīng)用，但其保護(hù)效果不穩(wěn)定。另外，BCG接種干擾了利用PPD對MTB感染的診斷，接種免疫缺陷病人可能導(dǎo)致播散性感染等缺陷。鑒于BCG自身的不足，以及當(dāng)前TB流行的嚴(yán)重性，研究更有效的疫苗具有重要意義。 基因免疫在包括TB的多種傳染病的動物模型中可引起體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。利用質(zhì)粒DNA真核表達(dá)載體，已經(jīng)有24個MTB抗原被表達(dá)，這些抗原主要來自MTB培養(yǎng)濾液蛋白（CFP）。其中有幾個蛋白在動物模型中顯示了較高的保護(hù)性，如Ag85復(fù)合體、ESAT6、MPT64、Hsp65和PstS3等。因而基因免疫可能是有希望的用于防治TB的一種有效方法。 ... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
    一、 TB威脅的嚴(yán)重程度和新型疫苗研究的意義
    二、 理想的預(yù)防TB疫苗的特征
    三、 TB新型疫苗的研究進(jìn)展
        1) 現(xiàn)有的TB新型疫苗的概況和優(yōu)缺點
        2) 亞單位疫苗
        3) 基因工程重組活疫苗
        4) 減毒活疫苗
        5) 基因疫苗
    四、 展望
研究內(nèi)容
    第一部分 MTB Ag85B基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建和免疫原性研究
        一、 實驗材料
        二、 實驗方法
            1. MTB的培養(yǎng)
            2. MTB基因組DNA的提取
            3. MTB的培養(yǎng)和培養(yǎng)濾液蛋白（CFP）的制備
            4. MTB H37Ra菌株Ag85B基因的擴(kuò)增、克隆及序列分析
            5. 亞克隆法構(gòu)建Ag85B基因的真核表達(dá)載體
            6. 表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化和酶切鑒定
            7. 質(zhì)粒的大量提取和純化
            8. 轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞
            9. RT-PCR檢測Ag85B成熟蛋白mRNA的表達(dá)
            10. 基因免疫
            11. 基因免疫小鼠血清中Ag85B抗體的檢測
        三、 結(jié)果
            1. Ag85B基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2. Ag85B基因的克隆
            3. MTB H37Ra株Ag85B基因的序列分析
            4. 同源性收索的結(jié)果
            5. MTB Ag85B基因的真核表達(dá)載體的構(gòu)建
            6. Ag85B成熟蛋白mRNA在CHO細(xì)胞中的表達(dá)
            7. Dot blotting檢測結(jié)果
            8. 血清Ag85B抗體的滴度
        四、 討論
    第二部分 MTB Ag85B成熟蛋白基因疫苗的細(xì)胞免疫反應(yīng)和保護(hù)性的初步研究
        一、 實驗材料
        二、 實驗方法
            1. MTB H37Rv菌株的培養(yǎng)和定量
            2. 基因免疫
            3. 脾臟細(xì)胞懸液的制備和單個核細(xì)胞的分離與計數(shù)
            4. 抗原特異的脾淋巴細(xì)胞增殖實驗
            5. IFNγ的誘生
            6. IFNγ含量的檢測
            7. MTB H37Rv毒株的攻擊實驗
            8. 過繼免疫保護(hù)實驗
            9. 脾臟細(xì)菌CFU計數(shù)及統(tǒng)計學(xué)檢驗
        三、 結(jié)果
            1. 脾淋巴細(xì)胞增殖實驗
            2. IFNγ的含量
            3. 基因免疫的保護(hù)性
            4. 過繼免疫的保護(hù)性
        四、 討論
小結(jié)
致 謝
參考文獻(xiàn)



本文編號：2965179