微小RNA（microRNA, miRNA）是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新型內(nèi)源性非編碼小RNA分子,在器官發(fā)育、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞分化以及機(jī)體免疫中都起著關(guān)鍵的作用。最新研究證實(shí)miRNA對(duì)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)有重要作用。目前有關(guān)miRNAs在抗結(jié)核分枝桿菌感染免疫調(diào)節(jié)作用的相關(guān)研究報(bào)道較少,尤其有關(guān)microRNA-124（miR-124）在肺臟細(xì)胞中的作用與機(jī)制方面的研究目前還未見報(bào)道。因此,探討miR-124和TLR信號(hào)通路之間的相互作用對(duì)肺泡上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌的免疫調(diào)節(jié)作用有著重要的科學(xué)理論價(jià)值和社會(huì)實(shí)際意義。本研究重點(diǎn)探討miR-124在肺泡上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染中的作用機(jī)制。以人肺臟肺泡上皮細(xì)胞系A(chǔ)549以及小鼠肺泡巨噬細(xì)胞系RAW264.7為靶細(xì)胞,用結(jié)核分枝桿菌疫苗株BCG感染并轉(zhuǎn)染miR-124模擬物（mimic）、miR-124抑制劑（：inhibitor）及niRNA陰性對(duì)照物（miR-124Nc）,通過ELISA、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫印跡等手段分析與結(jié)核免疫相關(guān)的主要免疫信號(hào)分子（TLR信號(hào)）和主要炎癥因子的變化；并通過niRNA靶序列雙熒光素酶... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 結(jié)核分枝桿菌感染免疫
        1.1.1 肺臟的先天免疫機(jī)制
        1.1.2 結(jié)核分枝桿菌感染免疫
    1.2 Toll樣受體（Toll-like receptor,TLR）信號(hào)通路
        1.2.1 TLRs的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 TLRs的組成結(jié)構(gòu)和配體
        1.2.3 TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
    1.3 miRNA的研究進(jìn)展
        1.3.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)和命名
        1.3.2 miRNA的合成及作用機(jī)制
        1.3.3 miRNA與免疫相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    1.4 miR-124及其細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)功能
    1.5 本研究的目的及意義
第二章 miR-124靶基因的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證
    引言
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.3 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 miR-124靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)
        2.2.2 miR-124可能靶基因的熒光素酶分析
    2.3 討論
第三章 miR-124對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染肺泡上皮細(xì)胞的免疫調(diào)控作用
    引言
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.3 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 A549細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)
        3.2.2 A549細(xì)胞RNA的提取鑒定
        3.2.3 A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果及轉(zhuǎn)染效率
        3.2.4 BCG誘導(dǎo)miR-124在A549細(xì)胞的表達(dá)
        3.2.5 miR-124通過靶向MyD88基因的3’UTR下調(diào)MyD88的表達(dá)
        3.2.6 miR-124下調(diào)BCG誘導(dǎo)的A549細(xì)胞MyD88的表達(dá)
        3.2.7 miR-124抑制BCG誘導(dǎo)的A549細(xì)胞TLR6和TRAF6的表達(dá)
        3.2.8 MyD88激發(fā)miR-124在A549細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.9 miR-124對(duì)A549細(xì)胞TLR信號(hào)通路下游炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響
    3.3 討論
第四章 miR-124對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)控作用
    引言
    4.1 材料和方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.3 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 BCG誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞miR-124的表達(dá)
        4.2.2 miR-124抑制巨噬細(xì)胞RAW264.7中TLR6蛋白水平的表達(dá)
        4.2.3 miR-124下調(diào)BCG誘導(dǎo)MyD88在巨噬細(xì)胞RAW264.7中的表達(dá)
        4.2.4 miR-124抑制BCG誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TRAF6表達(dá)
        4.2.5 miR-124抑制BCG誘導(dǎo)的NF-κB介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)
        4.2.6 MyD88激發(fā)miR-124在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)
    4.3 討論
第五章 miR-124在體內(nèi)抗結(jié)核分枝桿菌感染中的免疫調(diào)節(jié)作用與機(jī)理
    引言
    5.1 材料和方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.1.3 數(shù)據(jù)分析
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 健康人體和結(jié)核病患者體內(nèi)miR-124的表達(dá)差異分析
        5.2.2 BCG感染對(duì)小鼠肺臟miR-124表達(dá)的影響
        5.2.3 MyD88基因缺陷型小鼠的鑒定
        5.2.4 MyD88基因缺陷型小鼠肺臟中miR-124的表達(dá)
    5.3 討論
第六章 結(jié)論和展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：2965668