研究目的初步探討低氧誘導(dǎo)因子-1α/間質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（hypoxia-inducible factor-1alpha/ stromal cell-derived factor-1, HIF-1α/SDF-1）軸在低氧誘導(dǎo)祖細(xì)胞遷移和粘附至肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中的作用,以期進(jìn)一步了解肺血管重塑可能的分子和細(xì)胞學(xué)機(jī)制,進(jìn)而為低氧性肺動(dòng)脈高壓的治療提供新思路。方法以SD大鼠外周血祖細(xì)胞和SD大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞為研究對(duì)象,實(shí)驗(yàn)按下列步驟進(jìn)行:1、SD大鼠外周血祖細(xì)胞的動(dòng)員、分離和鑒定:粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）動(dòng)員外周血祖細(xì)胞、免疫磁珠分離純化SD大鼠外周血CD34/CXCR4陽(yáng)性祖細(xì)胞、免疫熒光和流式細(xì)胞儀（FCM）鑒定CD34/CXCR4陽(yáng)性祖細(xì)胞純度。2、SD大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離純化培養(yǎng):組織塊貼壁法分離純化SD大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。3、收集常氧和不同低氧時(shí)間點(diǎn)6h、12h和24h的肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞:1)免疫熒光檢測(cè)HIF-1α和SDF-1的表達(dá)情況;2)Western-blot檢測(cè)HIF-1α蛋白表達(dá)情況;3)ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SDF-1表達(dá)情況;4)ELISA檢測(cè)HI... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)胞檢測(cè)CD34/CXCR4陽(yáng)性細(xì)胞純度為91%

2. 低氧不同時(shí)間點(diǎn)組與常氧組 HIF-1α 蛋白表達(dá)情況 檢測(cè)不同低氧組和 HIF-1α 抑制劑組 SDF-112h、24h 誘導(dǎo) SDF-1 的表達(dá),6h 表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)，1低氧 12h+HIF-1α 抑制劑組 SDF-1 的表達(dá)明顯下降。0.01；與未加抑制劑比較：ΔP<0.05（圖 3）。ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 1.573x + 1.261R2= 0.910710白蛋度對(duì)數(shù)濃值

圖 3. ELISA 檢測(cè)不同條件下 SDF-1 的表達(dá)情況別代表常氧對(duì)照組、低氧 6h、12h、24h 組和低氧 12h+F-1 軸在祖細(xì)胞遷移中的作用（圖四）21%O2,5%CO2,74%N2h 組：1%O2,5%CO2,94%N2h+ HIF-1α 抑制劑 2-甲氧雌二醇（2ME2）組h+抗 SDF-1 組h+ HIF-1α 抑制劑 2-甲氧雌二醇（2ME2）+抗 SDIF-1α 和 SDF-1 表達(dá)后，低氧組的遷移指數(shù)高于常 相應(yīng)抗體均可以使 CD34/CXCR4 陽(yáng)性祖細(xì)胞向常氧對(duì)照組比：*P<0.05，** P<0.01，；加抑制劑用組與單純低氧組比：ΔP<0.05（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低氧誘導(dǎo)肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制[J]. 敖啟林,朱朋成,葛小娜,盧瑋,何惠華.  中華病理學(xué)雜志. 2006(09)
[2]低氧誘導(dǎo)因子-1α和內(nèi)皮素-1基因在大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓中的表達(dá)[J]. 敖啟林,郝春榮,熊密,王迪潯.  中華病理學(xué)雜志. 2002(02)
[3]低氧時(shí)NF-κB和P53在大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡中的變化[J]. 敖啟林,熊密,郝春榮,王迪潯.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2002(01)



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