背景:前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明過表達(dá)GATA-4骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌體(exosomes)可以通過抑制心肌細(xì)胞凋亡,有效修復(fù)心肌梗死引起的心肌損傷,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在其外泌體中miRNA-330-3p明顯高表達(dá)且功能涉及抗凋亡,提示miRNA-330-3p可能是外泌體修復(fù)心肌損傷的關(guān)鍵分子。目的:探討過表達(dá)GATA-4小鼠BMSCs分泌的外泌體(BMSCs~(GATA-4)-exosomes)中miR-330-3p的時(shí)-量變化。方法:在過表達(dá)GATA-4小鼠BMSCs培養(yǎng)體系內(nèi)加入miR-330-3p模擬劑(miR-330-3p-mimic)及抑制劑(miR-330-3p-inhibitor)作為BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)組及BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)組,將BMSCs~(GATA-4)組、BMSCs~(GATA-4-空載體)組、BMSCs組、BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic-空載體)組及BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor-空載體)組作為混雜因素對(duì)照組。上述各組與基因開啟劑強(qiáng)力霉素共培養(yǎng)24,48 h,提取各組細(xì)胞分泌的外泌體。采用RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞及其外泌體內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)量。采用光鏡評(píng)估BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)組、BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)組與BMSCs組細(xì)胞在24,48 h的形態(tài)變化。結(jié)果與結(jié)論:①BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)組細(xì)胞與外泌體內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)率最高,且隨著時(shí)間推移其miR-330-3p的表達(dá)逐漸增多;②BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)組細(xì)胞與外泌體內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)率最低,且隨著時(shí)間推移其miR-330-3p的表達(dá)逐漸減少;③BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)組、BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)組與BMSCs組在24,48 h的形態(tài)無變化;④結(jié)果表明,BMSCs內(nèi)miR-330-3p表達(dá)與外泌體內(nèi)miR-330-3p表達(dá)正相關(guān),BMSCs過表達(dá)miR-330-3p可以有效提高外泌體中miR-330-3p的表達(dá),而靜默miR-330-3p可以有效減少外泌體中miR-330-3p的表達(dá)。
【文章目錄】：
文章快速閱讀:
文題釋義:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設(shè)計(jì)
    1.2 時(shí)間及地點(diǎn)
    1.3 材料
        1.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.1 小鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定
        1.4.2 慢病毒載體及基因開啟技術(shù)構(gòu)建過表達(dá)GATA-4的BMSCs
        1.4.3 外泌體的提取
        1.4.4細(xì)胞分組及處理
        1.4.5 細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)變化
        1.4.6 RT-PCR評(píng)估細(xì)胞及外泌體內(nèi)miR-330-3p的時(shí)-量變化
    1.5 主要觀察指標(biāo)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果Results
    2.1 小鼠BMSCs三系分化結(jié)果
    2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染48h后小鼠BMSCs中GATA-4的表達(dá)
    2.3 采用ExoQuick-TC法提取外泌體的形態(tài)
    2.4 光鏡評(píng)估細(xì)胞培養(yǎng)24, 48 h的形態(tài)改變
    2.5 采用RT-PCR法檢測(cè)培養(yǎng)24 h各組細(xì)胞及外泌體內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)
    2.6采用RT-PCR法檢測(cè)培養(yǎng)48 h各組細(xì)胞及分泌的外泌體內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)
3 討論Discussion

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