目的制備甲型副傷寒沙門菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特異多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍亂毒素B亞單位(cholera toxin B subunit,CTB)結(jié)合疫苗,并初步探討其理化及生物學(xué)特性。方法 SPA OSP多糖原液(簡(jiǎn)稱OSP多糖)經(jīng)溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亞胺(EDAC)作用下與CTB偶聯(lián),結(jié)合物經(jīng)Sepharose4FF柱純化,獲得多糖-蛋白結(jié)合物,對(duì)其理化指標(biāo)、血清特異性、免疫原性及血清體外殺菌力進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果制備的SPA OSP-CTB結(jié)合物(簡(jiǎn)稱OSP-CTB結(jié)合物)衍化度為(2. 63±0. 13)%、多糖回收率為(74±0. 2)%;鑒別試驗(yàn)顯示OSP-CTB結(jié)合物與SPA O診斷血清、CTB抗體均有陽(yáng)性沉淀線產(chǎn)生;免疫小鼠血清中OSP-CTB結(jié)合物抗體滴度顯著增長(zhǎng),陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)100%,血清體外殺菌抗體滴度為1∶64。結(jié)論用溴化氰活化多糖制備的SPA OSP-CTB結(jié)合物具有良好免疫原性,可進(jìn)一步進(jìn)行疫苗研發(fā)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 原液、血清及菌株
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.4 OSP-CTB結(jié)合物制備
    1.5 OSP-CTB結(jié)合物檢測(cè)
        1.5.1 蛋白及多糖含量測(cè)定
        1.5.2 結(jié)合物分子大小分布
        1.5.3 鑒別試驗(yàn)
        1.5.4 EDAC及氰化物殘留量測(cè)定
        1.5.5 O-乙�；繙y(cè)定
        1.5.6 游離多糖測(cè)定
    1.6免疫原性檢測(cè)
    1.7免疫血清體外殺菌力檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 OSP-CTB結(jié)合物HPLC分析
    2.2 OSP-CTB結(jié)合物理化指標(biāo)及血清特異性檢測(cè)
        2.2.1蛋白及多糖含量
        2.2.2 結(jié)合物分子大小分布
        2.2.3 鑒別試驗(yàn)
        2.2.4 EDAC及氰化物殘留量
        2.2.5 O-乙酰基含量
        2.2.6 游離多糖含量
    2.3 免疫原性檢測(cè)
        2.3.1 OSP多糖免疫原性
        2.3.2 OSP-CTB結(jié)合物免疫原性
    2.4 免疫血清體外殺菌力
        2.4.1 OSP多糖與OSP-CTB結(jié)合物免疫血清體外殺菌力
        2.4.2 不同免疫次數(shù)OSP多糖與OSP-CTB結(jié)合物免疫血清體外殺菌力
3 討論

【參考文獻(xiàn)】

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1 譚亞軍;張庶民;侯啟明;;多糖蛋白結(jié)合疫苗中載體蛋白的研究與應(yīng)用[J];中國(guó)疫苗和免疫;2013年04期

2 廖翔;霍亂毒素佐劑的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2003年01期

【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2876999