目的:腸道病毒作為小核糖核酸病毒的成員之一,其病原特性已得到了廣泛的研究,為進一步探討其尚未完全清楚的病理學機理,利用來源于恒河猴的不同免疫細胞,對埃可病毒6型(Echovirus 6,Echo 6)毒株與樹突狀細胞的作用關系及其特征做了初步分析。方法:利用流式細胞儀及抗不同樹突狀細胞表面特征分子的抗體,從恒河猴外周血及骨髓分離未成熟樹突狀細胞,經(jīng)體外誘導培養(yǎng)后,以Echo 6病毒在感染復數(shù)為0.1的條件下感染樹突狀細胞,并于感染后不同時間點收集細胞,檢測病毒載量,繪制病毒增殖曲線,同時對上清中相關細胞因子含量做出動態(tài)檢測。結(jié)果:源于恒河猴外周血PBMC分選出的樹突狀細胞以成熟期樹突狀細胞(CD11~+/CD83~+)居多;而源于骨髓的細胞經(jīng)粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和重組人白細胞介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)刺激培養(yǎng)后誘導分化的樹突狀細胞則以未成熟細胞為主。Echo 6型病毒分別對未成熟樹突狀細胞和成熟樹突狀細胞進行感染后顯示,病毒在未成熟樹突狀細胞中有明顯增殖的趨勢而非在成熟樹突狀細胞中增殖。進一步檢測病毒感染這些細胞后效應分子的表達情況發(fā)現(xiàn),感染了Echo 6型病毒的未成熟樹突狀細胞出現(xiàn)腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)轉(zhuǎn)錄表達水平的明顯上升,同時這些細胞的表面標記呈現(xiàn)CD11~+/CD83~+趨勢。結(jié)論:Echo 6型病毒能夠感染未成熟樹突狀細胞并在其中出現(xiàn)明顯增殖趨勢,并在上調(diào)細胞TNF-α和rh IL-6表達水平的同時,促進這些細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒鞓渫粻罴毎?br>【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒與細胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 動物倫理
    1.4 恒河猴樹突狀細胞的分離及培養(yǎng)
        1.4.1 外周血單核細胞來源的樹突狀細胞
            1.4.1. 1 外周血單核細胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的分離
            1.4.1. 2 免疫磁珠分選CD1c+樹突狀細胞
            1.4.1. 3 CD1c+樹突狀細胞的培養(yǎng)
        1.4.2 骨髓源樹突狀細胞
            1.4.2. 1 骨髓源樹突狀細胞的分離
            1.4.2. 2 骨髓源樹突狀細胞的培養(yǎng)
    1.5 流式細胞分選
    1.6 Echo 6型病毒滴度的測定
    1.7 病毒感染細胞
    1.8 流式細胞檢測
    1.9 RNA提取
    1.1 0 實時定量PCR
    1.1 1 統(tǒng)計方法
2 結(jié)果
    2.1 恒河猴樹突狀細胞的分離培養(yǎng)
    2.2 Echo 6型病毒對未成熟樹突狀細胞的感染
    2.3 Echo 6型病毒對成熟樹突狀細胞的感染
    2.4 Echo 6型病毒感染猴樹突狀細胞可以上調(diào)TNF-α和IL-6的表達
3 討論

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