目的：IL-12是一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，在細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)試圖研究1)IL-12是否能誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡；2)那些信號(hào)傳導(dǎo)通路參與了凋亡誘導(dǎo)過程：3)T細(xì)胞那些表面分子是凋亡的效應(yīng)者；4)在抗原誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)中，IL-12如何調(diào)節(jié)T細(xì)胞凋亡：5)IL-12誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡對(duì)T細(xì)胞功能亞群的影響。 材料方法：T細(xì)胞取自健康自愿者和骨髓移植后+14、+21、+60天慢�；颊撸o予不同濃度(10-100ng／ml)IL-12處理后，Annexn V或TUNNEL法測(cè)細(xì)胞凋亡。表面分子標(biāo)志(CD25、CD95、FasL、TNFR)分別用FITC、PE、生物素標(biāo)記后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，同時(shí)用半定量RT-PCR測(cè)FasL mRNA表達(dá)。正常T細(xì)胞與自體或異基因B細(xì)胞(Raji)混合培養(yǎng)，加入IL-12(50ng／ml)處理后，用流式細(xì)胞儀測(cè)定。測(cè)凋亡率(TUNNEL法)和表面分子CD25、CD95、FasL、TNPR。骨髓移植后+14、+21和+60天患者血中T細(xì)胞加入IL-12及信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑培養(yǎng)后，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡表面分子表達(dá)與T細(xì)胞亞群變化，免疫酶聯(lián)雙夾心法測(cè)IFN-r和IL-4滴度。 結(jié)果： 1、不論有無抗原刺激IL-12可以誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，凋亡率與IL-12劑量，作用時(shí)間成正相關(guān)。 2、在誘導(dǎo)凋亡過程細(xì)胞表面CD25和FasL表達(dá)增高，F(xiàn)as和TNFR變化不大，(p＞0.05) 3、半定量RT-PCR檢測(cè)顯示FasLmRNA表達(dá)亦上調(diào)。 4、Caspase-3抑制試驗(yàn)證明凋亡效應(yīng)依賴于Caspare-3活性。 5、加入PTK、PKC和PKA信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑后均可使FasL表達(dá)下調(diào)。但不影響CD25表達(dá)。 6、骨髓移植后供體T細(xì)胞在IL－12作用下亦可被誘導(dǎo)凋亡，同時(shí)T細(xì)胞 亞群CD4AIDS比例增高，IFN－r滴度升高，IL－4滴度下降。 結(jié)論： l、IL．12可誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡。誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)呈時(shí)間和劑量依賴性。 2、IL－12可增加 T細(xì)胞表面分子 CD25表達(dá)率，提示幾－12可使T細(xì)胞活 化增殖。 3、IL－12增加 T細(xì)胞表面 FasL表達(dá)，但對(duì) Fas和 TNFR無明顯作用，IL－12 通過Fa，F(xiàn)asL途徑誘導(dǎo)凋亡。 4、Caspase習(xí)抑制試驗(yàn)證明 IL＊ 對(duì) T細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用由 Fas＊asL 相互作用介導(dǎo)，并依賴 CAspAs卜3活性。 5、PTK、PKC和 PKA均涉及 IL－12誘導(dǎo) T細(xì)胞凋亡過程。但不能阻斷 CD25表達(dá)。說明IL－12對(duì)T細(xì)胞的誘導(dǎo)活化增殖和誘導(dǎo)凋亡作用是由不同信 號(hào)通路傳遞。只有PTK抑制可改變FaL rnRNA表達(dá)。 6、IL．12增強(qiáng) hl免疫反應(yīng)，增加 T細(xì)胞亞群 CD4／CDS比例。提示發(fā)生 凋亡的細(xì)胞以CDS＋細(xì)胞為主�？赡苡兄跍p輕GVHD。
【學(xué)位單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

ACD3細(xì)胞純度

CHAI004對(duì)IL一12作用的阻斷效應(yīng)
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐紅薇,吳長(zhǎng)有,李波,任歡,鐘照華,李呼倫,邢淑賢,田景先;IL-12、IL-7、IL-2體外協(xié)同誘導(dǎo)人PBMC增殖和PBMC殺瘤活性的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國免疫學(xué)雜志;1998年05期

本文編號(hào)：2857929