DNA疫苗能夠同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng),而且與傳統(tǒng)疫苗相比,在設(shè)計(jì)、制備和安全性等方面具有諸多優(yōu)勢(shì),這促使DNA疫苗平臺(tái)逐漸成為疫苗研究開發(fā)的熱點(diǎn)。樹突狀細(xì)胞是專職抗原加工遞呈細(xì)胞,在疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生先天免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。本研究的主要目的是采用DNA疫苗技術(shù)研究開發(fā)用于抗腫瘤的DNA疫苗并且對(duì)樹突狀細(xì)胞對(duì)抗原加工遞呈的機(jī)理進(jìn)行初步探討。 P42.3基因具有腫瘤特異性與分裂周期密切相關(guān),并且發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤中表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)預(yù)示p42.3抗原可以作為腫瘤靶標(biāo)用于疫苗的研制。在本研究中,我們采用體內(nèi)穿孔儀電擊免疫方式將編碼p42.3抗原的DNA疫苗分別免疫接種給C57BL/6小鼠,并且利用B16F10黑色素瘤細(xì)胞給免疫前或免疫后的小鼠進(jìn)行攻擊,評(píng)價(jià)p42.3DNA疫苗對(duì)小鼠黑色素瘤的預(yù)防和治療效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,p42.3DNA疫苗能夠在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平針對(duì)p42.3抗原的特異性細(xì)胞殺傷和分泌IFN-γ、perforin和granzyme B的CD8+T細(xì)胞。通過評(píng)價(jià)腫瘤的生長(zhǎng)速度和腫瘤的重量,結(jié)果表明p42.3DNA疫苗在小鼠黑色素瘤預(yù)防和治療模型中都能誘導(dǎo)一定的抗腫瘤效果。因此,本研究首次證明采用針對(duì)新腫瘤靶標(biāo)p42.3的DNA疫苗可能是一個(gè)具有潛在價(jià)值的抗腫瘤治療手段。 HBV感染引起的疾病在全球都有廣泛分布并且嚴(yán)重影響人類健康。盡管HBV預(yù)防性疫苗在很大程度上降低了HBV的感染,但是對(duì)HBV感染的治療仍然是一個(gè)嚴(yán)重的全球問題。前期聞?dòng)衩吩菏窟M(jìn)行了一系列的臨床實(shí)驗(yàn)研究,這些臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明免疫酵母表達(dá)的HBsAg和抗HBsAg免疫球蛋白(HBIG)形成的復(fù)合物(YIC)能夠在部分慢性乙肝病人中降低HBV病毒載量并且誘導(dǎo)產(chǎn)生抗HBeAg的抗體。在本研究中,我們深入分析了HBsAg和HBIG形成的免疫復(fù)合物在樹突狀細(xì)胞中的攝入和加工遞呈過程,結(jié)果表明HBsAg和HBIG免疫復(fù)合物的攝入是通過樹突狀細(xì)胞上的Fcr受體介導(dǎo)并且以這種方式攝入的抗原能夠發(fā)生較多的交叉遞呈,并且免疫復(fù)合物處理的樹突狀細(xì)胞能夠在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生更強(qiáng)的T細(xì)胞反應(yīng)。這些結(jié)果豐富了關(guān)于抗原抗體免疫復(fù)合物在抗原遞呈細(xì)胞中的加工和遞呈研究并且為我們進(jìn)一步優(yōu)化這種治療性乙肝疫苗提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R392
【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
縮略詞表
實(shí)驗(yàn)主要儀器
圖表清單
第一章 引言
    1.1 腫瘤特征及其免疫調(diào)控和治療
        1.1.1 腫瘤的特征
        1.1.2 腫瘤免疫調(diào)控
        1.1.3 腫瘤免疫治療
        1.1.4 結(jié)語
    1.2 DNA疫苗及其在腫瘤中的臨床研究
        1.2.1 DNA疫苗制備和免疫流程
        1.2.2 DNA疫苗作用機(jī)理
        1.2.3 DNA疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)
        1.2.4 DNA疫苗增強(qiáng)策略
        1.2.5 腫瘤DNA疫苗的臨床研究
        1.2.6 結(jié)語
    1.3 樹突狀細(xì)胞抗原加工遞呈
        1.3.1 DC的發(fā)現(xiàn)和分型
        1.3.2 DC對(duì)外來抗原加工遞呈途徑
        1.3.3 MHC和抗原遞呈
        1.3.4 抗原交叉遞呈機(jī)制和模型
        1.3.5 免疫復(fù)合物調(diào)控理論
        1.3.6 結(jié)語
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,細(xì)胞及試劑
    2.2 質(zhì)粒DNA大量制備
    2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NIH-3T3細(xì)胞
    2.4 Western Blot
    2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及免疫
    2.6 P42.3蛋白原核表達(dá)和純化
    2.7 ELISA法檢測(cè)血清特異性抗體水平
    2.8 小鼠黑色素瘤模型
    2.9 體內(nèi)CTL水平檢測(cè)
    2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子的表達(dá)水平
    2.11 免疫熒光
    2.12 活細(xì)胞成像
    2.13 DC2.4體外孵育和過繼轉(zhuǎn)移
    2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 P42.3 DNA疫苗在小鼠黑色素瘤模型中抗腫瘤效果研究
    3.1 引言
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 重組質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的表達(dá)以及小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16F10中p42.3的表達(dá)
        3.2.2 P42.3蛋白原核表達(dá)純化和鑒定
        3.2.3 P42.3 DNA疫苗能夠在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性IgG抗體
        3.2.4 免疫p42.3 DNA疫苗能夠抑制皮下B16F10黑色素瘤的生長(zhǎng)
        3.2.5 免疫p42.3 DNA疫苗能夠抑制B16F10的實(shí)驗(yàn)性肺部轉(zhuǎn)移
        3.2.6 免疫p42.3 DNA疫苗能夠在一定程度上治療皮下B16F10黑色素瘤
        3.2.7 CD8+T細(xì)胞在p42.3 DNA疫苗誘導(dǎo)的抗腫瘤中起著重要的作用
        3.2.8 免疫p42.3 DNA疫苗能夠在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平CTL
        3.2.9 免疫p42.3 DNA疫苗能夠在小鼠體內(nèi)激活CD8+T細(xì)胞
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 免疫復(fù)合物在樹突狀細(xì)胞中的加工和遞呈研究
    4.1 引言
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 IC易被THP-1分化的巨噬細(xì)胞攝取并且IC主要分布在胞內(nèi)酸性細(xì)胞器中
        4.2.2 DC2.4細(xì)胞對(duì)IC的攝入是部分依賴于Fcγ受體
        4.2.3 IC能夠與早期內(nèi)體、晚期內(nèi)體和溶酶體共定位,但與高爾基體不能共定位
        4.2.4 IC在早期內(nèi)體、晚期內(nèi)體和溶酶體中發(fā)生部分分離
        4.2.5 IC能夠與分布于內(nèi)體、溶酶體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子共定位
        4.2.6 孵育IC的DC2.4細(xì)胞能夠在小鼠體內(nèi)有效的激活T細(xì)胞
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
    附錄1：常用試劑配方
    附錄2：pcDNA3載體質(zhì)粒圖譜
    附錄3：pET28a(+)載體質(zhì)粒圖譜
    附錄4：P42.3 基因序列
個(gè)人簡(jiǎn)介
博士期間已發(fā)表和待發(fā)表文章

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張玉;熊正愛;;電基因療法治療腫瘤的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年13期

2 周紅;許文;陳小娥;;瘢痕疙瘩同位素治療方法的臨床研究[J];東南國(guó)防醫(yī)藥;2013年04期

3 崔永奇;耿沁;顧愛琴;朱淼鑫;孔韓衛(wèi);孫磊;劉蕾;閆明霞;姚明;;肺腺癌骨轉(zhuǎn)移裸小鼠模型的建立及MicroCT觀察[J];中國(guó)肺癌雜志;2013年09期

4 李海明;;動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI在卵巢腫瘤中的研究進(jìn)展[J];放射學(xué)實(shí)踐;2013年09期

5 李艷華;魏素菊;;凝血功能與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2013年12期

6 王赟;柯飛;趙安芳;陳蘭英;;自噬在癌癥發(fā)生中的雙重作用[J];癌變.畸變.突變;2013年06期

7 王閣;李建;;重視影像學(xué)檢查在肝占位性病變鑒別診斷中的地位[J];實(shí)用肝臟病雜志;2013年05期

8 Subhasree Nag;Jiangjiang Qin;Kalkunte S.Srivenugopal;Minghai Wang;Ruiwen Zhang;;The MDM2-p53 pathway revisited[J];The Journal of Biomedical Research;2013年04期

9 陳英杰;程晶;周大橋;賀勁松;;平和質(zhì)慢性HBV攜帶者T淋巴細(xì)胞亞群及Th1/Th2型細(xì)胞因子分析[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2013年22期

10 王雪梅;崔亞南;吳瓊;張磊超;王麗萍;;甲狀腺微小乳頭狀癌發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素分析[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2013年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李莉;LIGHT(TNFSF14)作為HPV16E7DNA疫苗佐劑在宮頸癌治療中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 王鑫鑫;SIRT1對(duì)胃癌惡性生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

3 朱智能;FOXQ1介導(dǎo)TGF-β1/Smad信號(hào)通路調(diào)控膀胱癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

4 杜漸;胰腺癌BxPC-3細(xì)胞上清液通過上調(diào)樹突狀細(xì)胞miRNA-146a的表達(dá)抑制其成熟及免疫功能的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

5 閔江;結(jié)直腸癌中新的細(xì)胞亞群NCCC的分離與生物學(xué)功能的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

6 李玲;Rasfonin抗腫瘤活性評(píng)價(jià)及機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

7 段曉品;刺激響應(yīng)性聚合物膠束在抗腫瘤轉(zhuǎn)移及逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥中的應(yīng)用[D];沈陽藥科大學(xué);2013年

8 楊梅;NAIF1基因在胃癌細(xì)胞中的功能與機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 傅佩芬;胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];浙江大學(xué);2013年

10 孫青;慢周期腫瘤細(xì)胞的相關(guān)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉芳;利用高能量聚焦超聲誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的新策略研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 李園園;吉西他濱衍生物SL-01對(duì)人乳腺癌的抑制作用研究[D];山東大學(xué);2013年

3 陳小慧;p53、p21、VEGF和CXCR4在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義[D];蘇州大學(xué);2013年

4 吳庭楓;A2B5~+/CD133~-與CD133~+/A2B5~-膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球表型特點(diǎn)及其移植瘤病理實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

5 潘晨琛;Cre重組酶介導(dǎo)的神經(jīng)元條件死亡系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用[D];蘭州大學(xué);2013年

6 許秀坤;iNKT細(xì)胞新配體過氧化物衍生磷脂的表達(dá)研究和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎血清抗體糖基化的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

7 魏子程;EZH2在舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及生物學(xué)作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

8 屠燕;IL-17在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與臨床意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

9 趙曉燕;HBV隱匿性感染及其光化學(xué)滅活機(jī)制的研究[D];華東師范大學(xué);2013年

10 金萌;姜黃素聯(lián)合5-氟尿嘧啶對(duì)HepG2細(xì)胞PI3K/AKT信號(hào)通路及相關(guān)調(diào)控分子的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2847496