病毒在感染細(xì)胞的過(guò)程中，病毒能在不同的復(fù)制時(shí)相以不同的方式與宿主細(xì)胞的多種組分發(fā)生相互作用。正是這種多層次相互作用導(dǎo)致了病毒對(duì)細(xì)胞感染的不同病理學(xué)結(jié)果。病毒和細(xì)胞表面相應(yīng)受體的結(jié)合起始了病毒與細(xì)胞之間的相互作用，這個(gè)結(jié)合過(guò)程可以和正常生理配體一樣使受體活化，并激活相應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)成分，使病毒所攜帶的特定信號(hào)傳入胞內(nèi)。在這一層次的研究，將使我們認(rèn)識(shí)病毒感染過(guò)程中的第一個(gè)步驟在病毒與細(xì)胞相互作用領(lǐng)域中的具體機(jī)理和意義。單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1)是一種具有較強(qiáng)傳染性的病原體，它是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的雙鏈DNA病毒，對(duì)于HSV-1病毒結(jié)合受體所導(dǎo)致的細(xì)胞早期基因產(chǎn)物功能的分析，不僅能加深對(duì)HSV-1和細(xì)胞之間相互作用的理解，也有助于闡明細(xì)胞中未知功能蛋白的作用方式及其分子機(jī)理。 本研究的重點(diǎn)是分析HSV-1病毒感染KMB-17后誘導(dǎo)的差異基因htrp所編碼蛋白HTRP(human transcription regulator protcill)在細(xì)胞內(nèi)的功能意義。我們以病毒學(xué)、分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，結(jié)合酵母雙雜交、報(bào)告基因等研究方法，對(duì)HTRP的功能特性和其作用蛋白進(jìn)行了初步的研究。通過(guò)對(duì)htrp基因的Northern雜交分析發(fā)現(xiàn)htrp基因在腦、心臟、肝、肺、脾、腎組織中均有表達(dá)，但在心臟組織中為低水平表達(dá)，并證實(shí)了htrp基因的表達(dá)與HSV-1的刺激作用有密切的關(guān)聯(lián)。 通過(guò)觀察HTRP—GFP融合蛋白在活細(xì)胞內(nèi)的熒光分布確定了HTRP蛋白定位于胞核中，且在不同的細(xì)胞中HTRP蛋白的胞核定位并無(wú)差別；流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果發(fā)現(xiàn)上調(diào)HTRP蛋白的表達(dá)能顯著地誘導(dǎo)細(xì)胞死亡；GST pull-down實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了HTRP蛋白在胞內(nèi)具有三個(gè)相互作用的蛋白，并通過(guò)酵母雙雜交系統(tǒng)篩選和GST pull-down+免疫印記的方法證實(shí)了其中一個(gè)相互作用蛋白為輔抑制因子復(fù)合物mSin3A的組成成分之一SAP30；通過(guò)HTRP缺失體—EGFP融合蛋白轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，HTRP缺失體和SAP30相互作用的β-半乳糖苷酶分析確定HTRP蛋白分子
【學(xué)位單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R373
【部分圖文】：

圖1質(zhì)粒pGE即一N2圖譜Fig1StruetureofPGEFP一NZ圖2質(zhì)粒GPE--xsx一1圖譜Fig2StruetureofPGEX一sx一I

2.人單純疙疹病毒HSV一:醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所病毒免疫室保存，培養(yǎng)并收獲HPe一2細(xì)胞，蔗糖密度梯度離心純化，滴度為1.0t‘CCIDos/ml。大腸桿菌菌株:EochDHS“醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所病毒免疫室保存.基因型:SupE44△LaeU169(甲80LaeZ△M15)，hsdR17reeAIendAIgyrA96，thi一1re1AI。.EochBL21醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所病毒免疫室保存�；蛐�:，F(xiàn)O川口兀hsds(ar一確少，卯I，比刃。3.質(zhì)粒:克隆載體pMD18一T，寶生物公司;克隆載體UPC18，本實(shí)驗(yàn)室保存;表達(dá)載體pGEX一SX一1，peDNA3.0，pEGFpNZ，pGADT7，pGBKT7，pACTZ，pSVpgal等由本實(shí)驗(yàn)室保存。pSG424，sxGa14一TK一Lueiferase由HowardHughesMedi。alInstitute的DannyReinberg教授饋贈(zèng)。

圖3質(zhì)粒沁KBT7圖譜Fig3StruetureofPGBKT7.圖4質(zhì)粒pATCZ圖譜Fig4StruetureofPACT2..圖5質(zhì)粒GPATD7圖譜Fig5StruetureofGPATD7.圖6質(zhì)粒pSG424圖譜Fig6StruetureofPGS424.
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉龍丁,董承紅,董少忠,王麗春,胡方,趙紅玲,李琦涵;HSV-1感染細(xì)胞中HTRP基因的克隆及表達(dá)純化[J];病毒學(xué)報(bào);2003年01期

2 李琦涵,董承紅,王炯,王麗春,孫明,楊芳;兩種病毒與細(xì)胞結(jié)合誘導(dǎo)的原癌基因早期表達(dá)[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2000年02期

3 王炯,劉龍丁,孫明,董承紅,王麗春,王晶晶,李琦涵;在HSVI感染細(xì)胞中類PEBP蛋白基因的克隆及分析[J];中國(guó)病毒學(xué);2002年02期

本文編號(hào)：2842155