目的：研究在2型糖尿病大鼠發(fā)病時氧化應激水平對骨骼肌內(nèi)GLUT4的表達以及轉(zhuǎn)位的影響，以探討氧化應激在糖尿病大鼠骨骼肌病變的機制。方法：采用一次性左下腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ50mg/kg），并結合高糖高脂飲食制備2型糖尿病大鼠模型。40只健康SD大鼠隨機分為糖尿病組、高脂組、正常組。高脂組，正常組用相同劑量的檸檬酸緩沖液一次性左下腹腔注射，高脂組喂養(yǎng)高脂高糖飼料，正常組喂養(yǎng)普通飼料。觀察各組大鼠的一般情況，并每周檢測其體重以及血糖變化。各組大鼠喂養(yǎng)3個月后處死，心臟取血離心制備血清檢測血清中胰島素、血糖、總膽固醇,、甘油三酯水平，以及氧化應激各項指標：丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量、還原型谷胱甘肽（GSH）含量，錳超氧化物歧化酶歧化酶（Mn-SOD）活性、過氧化氫酶（CAT）活性。取大鼠肝臟組織和骨骼肌組織做石蠟切片：HE染色觀察組織病理學變化，免疫組織化學染色觀察骨骼肌組織中GLUT4的表達。取骨骼肌組織速凍于-80℃冰箱，采用Western Blot和PCR方法分別從蛋白水平和基因水平檢測GLUT4蛋白的表達變化。分離骨骼肌細胞膜蛋白和細胞胞質(zhì)蛋白，通過Western Blot方法檢測GLUT4的轉(zhuǎn)位變化。結果：（1）2型糖尿病大鼠模型建模成功率80%。（2）大鼠一般情況：正常對照組大鼠飲水少，尿量少，皮毛光滑柔順，體重逐漸增長，血糖正常。高脂組大鼠體重增長較快，皮毛光潤，活動遲緩，血糖緩慢升高。糖尿病組出現(xiàn)不同程度的多飲、多尿、多食、體重增長快的癥狀，毛色無光澤，精神不振，個別出現(xiàn)爛爪爛尾現(xiàn)象，血糖顯著升高。（3）與正常對照組大鼠相比，高脂組大鼠各項生化指標有增加趨勢，但無統(tǒng)計學意義；糖尿病組大鼠各項生化指標顯著增高（P＜0.01）（4）HE染色顯示正常對照組大鼠肝臟骨骼肌形態(tài)結構正常完整。高脂組出現(xiàn)不同程度的病變。糖尿病組大鼠肝臟和骨骼肌出現(xiàn)于2型糖尿病臨床病例一致的病變。（5）與正常對照組大鼠相比，糖尿病組大鼠體內(nèi)氧化應激水平顯著升高。（6）Westernblotting結果顯示高脂組大鼠骨骼肌內(nèi)GLUT4蛋白表達有降低趨勢；糖尿病組大鼠骨骼肌內(nèi)GLUT4蛋白表達量顯著低于正常對照組（P＜0.01）。（7）RT-PCR結果顯示，與正常對照組相比，高脂組與糖尿病組大鼠骨骼肌中GLUT4mRNA表達均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。（8）分離胞質(zhì)胞膜蛋白后，高脂組與糖尿病組大鼠胞膜上GLUT4含量均顯著低于正常對照組（P＜0.01）；高脂組與糖尿病組大鼠胞質(zhì)中GLUT4含量較正常對照組有降低趨勢，但無統(tǒng)計學意義。（9）免疫組化結果顯示，與正常對照組相比，高脂組與糖尿病組大鼠骨骼肌中GLUT4蛋白含量均顯著降低（P＜0.01）。結論：（1）成功復制實驗性2型糖尿病大鼠模型，并證明其體內(nèi)存在著明顯的胰島素抵抗。（2）2型糖尿病大鼠骨骼肌中存在著明顯的氧化應激損傷，并顯示與GLUT4的改變有關。（3）氧化應激對2型糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4的表達與轉(zhuǎn)位均有抑制作用，且對后者的抑制更為顯著。
【學位單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R587.1;R-332
【部分圖文】：

4.1 實驗動物的一般情況正常對照組大鼠飲水少，尿量少，皮毛光滑柔順，體重逐漸增長，血糖正常，未見動物死亡。高脂組大鼠體重增長較快，皮毛光潤，活動遲緩，血糖緩慢升高，出現(xiàn) 1 例死亡。糖尿病組在注射 STZ 三個月后出現(xiàn)不同程度的多飲、多尿、多食、體重增長快的癥狀，毛色無光澤，精神不振，個別出現(xiàn)爛爪爛尾現(xiàn)象，血糖顯著升高。4.2 2 型糖尿病大鼠模型的成模情況4.2.1 建模過程中各組體重變化正常對照組大鼠體重較為平穩(wěn)，呈緩慢增加趨勢，模型組與糖尿病組體重增長較快，符合 2 型糖尿病肥胖的癥狀。如圖 4-1。

糖 尿 病 組鼠肝臟組織形態(tài)學變化（HE 染色， 200×nge of histomorphology of liver in each group 00)

糖尿病組大鼠骨骼肌組織形態(tài)學變化（HE 染色， 200×change of histomorphology of skeletal muscle in eacaining，×200)
【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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相關博士學位論文 前1條

1 馬慧娟;高脂飲食誘導的胰島素抵抗大鼠骨骼肌線粒體相關蛋白PGC-1α的表達及調(diào)控[D];河北醫(yī)科大學;2010年

本文編號：2840803