目的：研究在2型糖尿病大鼠發(fā)病時(shí)氧化應(yīng)激水平對(duì)骨骼肌內(nèi)GLUT4的表達(dá)以及轉(zhuǎn)位的影響，以探討氧化應(yīng)激在糖尿病大鼠骨骼肌病變的機(jī)制。方法：采用一次性左下腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ50mg/kg），并結(jié)合高糖高脂飲食制備2型糖尿病大鼠模型。40只健康SD大鼠隨機(jī)分為糖尿病組、高脂組、正常組。高脂組，正常組用相同劑量的檸檬酸緩沖液一次性左下腹腔注射，高脂組喂養(yǎng)高脂高糖飼料，正常組喂養(yǎng)普通飼料。觀察各組大鼠的一般情況，并每周檢測(cè)其體重以及血糖變化。各組大鼠喂養(yǎng)3個(gè)月后處死，心臟取血離心制備血清檢測(cè)血清中胰島素、血糖、總膽固醇,、甘油三酯水平，以及氧化應(yīng)激各項(xiàng)指標(biāo)：丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量、還原型谷胱甘肽（GSH）含量，錳超氧化物歧化酶歧化酶（Mn-SOD）活性、過氧化氫酶（CAT）活性。取大鼠肝臟組織和骨骼肌組織做石蠟切片：HE染色觀察組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色觀察骨骼肌組織中GLUT4的表達(dá)。取骨骼肌組織速凍于-80℃冰箱，采用Western Blot和PCR方法分別從蛋白水平和基因水平檢測(cè)GLUT4蛋白的表達(dá)變化。分離骨骼肌細(xì)胞膜蛋白和細(xì)胞胞質(zhì)蛋白，通過Western Blot方法檢測(cè)GLUT4的轉(zhuǎn)位變化。結(jié)果：（1）2型糖尿病大鼠模型建模成功率80%。（2）大鼠一般情況：正常對(duì)照組大鼠飲水少，尿量少，皮毛光滑柔順，體重逐漸增長(zhǎng)，血糖正常。高脂組大鼠體重增長(zhǎng)較快，皮毛光潤(rùn)，活動(dòng)遲緩，血糖緩慢升高。糖尿病組出現(xiàn)不同程度的多飲、多尿、多食、體重增長(zhǎng)快的癥狀，毛色無光澤，精神不振，個(gè)別出現(xiàn)爛爪爛尾現(xiàn)象，血糖顯著升高。（3）與正常對(duì)照組大鼠相比，高脂組大鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)有增加趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；糖尿病組大鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)顯著增高（P＜0.01）（4）HE染色顯示正常對(duì)照組大鼠肝臟骨骼肌形態(tài)結(jié)構(gòu)正常完整。高脂組出現(xiàn)不同程度的病變。糖尿病組大鼠肝臟和骨骼肌出現(xiàn)于2型糖尿病臨床病例一致的病變。（5）與正常對(duì)照組大鼠相比，糖尿病組大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平顯著升高。（6）Westernblotting結(jié)果顯示高脂組大鼠骨骼肌內(nèi)GLUT4蛋白表達(dá)有降低趨勢(shì)；糖尿病組大鼠骨骼肌內(nèi)GLUT4蛋白表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組（P＜0.01）。（7）RT-PCR結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，高脂組與糖尿病組大鼠骨骼肌中GLUT4mRNA表達(dá)均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。（8）分離胞質(zhì)胞膜蛋白后，高脂組與糖尿病組大鼠胞膜上GLUT4含量均顯著低于正常對(duì)照組（P＜0.01）；高脂組與糖尿病組大鼠胞質(zhì)中GLUT4含量較正常對(duì)照組有降低趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（9）免疫組化結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，高脂組與糖尿病組大鼠骨骼肌中GLUT4蛋白含量均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論：（1）成功復(fù)制實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠模型，并證明其體內(nèi)存在著明顯的胰島素抵抗。（2）2型糖尿病大鼠骨骼肌中存在著明顯的氧化應(yīng)激損傷，并顯示與GLUT4的改變有關(guān)。（3）氧化應(yīng)激對(duì)2型糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4的表達(dá)與轉(zhuǎn)位均有抑制作用，且對(duì)后者的抑制更為顯著。
【學(xué)位單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R587.1;R-332
【部分圖文】：

4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般情況正常對(duì)照組大鼠飲水少，尿量少，皮毛光滑柔順，體重逐漸增長(zhǎng)，血糖正常，未見動(dòng)物死亡。高脂組大鼠體重增長(zhǎng)較快，皮毛光潤(rùn)，活動(dòng)遲緩，血糖緩慢升高，出現(xiàn) 1 例死亡。糖尿病組在注射 STZ 三個(gè)月后出現(xiàn)不同程度的多飲、多尿、多食、體重增長(zhǎng)快的癥狀，毛色無光澤，精神不振，個(gè)別出現(xiàn)爛爪爛尾現(xiàn)象，血糖顯著升高。4.2 2 型糖尿病大鼠模型的成模情況4.2.1 建模過程中各組體重變化正常對(duì)照組大鼠體重較為平穩(wěn)，呈緩慢增加趨勢(shì)，模型組與糖尿病組體重增長(zhǎng)較快，符合 2 型糖尿病肥胖的癥狀。如圖 4-1。

糖 尿 病 組鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)變化（HE 染色， 200×nge of histomorphology of liver in each group 00)

糖尿病組大鼠骨骼肌組織形態(tài)學(xué)變化（HE 染色， 200×change of histomorphology of skeletal muscle in eacaining，×200)
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

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本文編號(hào)：2840803