第一部分 獼猴胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化、干性維持及腦內(nèi)移植 目的：建立穩(wěn)定高效的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)體系,使其可成功的分化及特性維持；觀察研究獼猴神經(jīng)干細(xì)胞同種腦內(nèi)移植后的轉(zhuǎn)歸,進(jìn)一步驗證獼猴神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)后的特性及可應(yīng)用性,為神經(jīng)干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究。 方法：1)以綠色熒光蛋白(Green fluorescence protein, GFP)為標(biāo)記,探討獼猴胚胎干細(xì)胞向玫瑰花環(huán)(Rosettes)結(jié)構(gòu)神經(jīng)干細(xì)胞的分化及其堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)和表皮生長因子(Epidermal growth factor, EGF)的擴(kuò)增培養(yǎng)；2)經(jīng)立體定位,利用微量注射器,將5ul(1X105個/u1)神經(jīng)干細(xì)胞移植到獼猴海馬區(qū),移植后2個月后,取腦組織冰凍切片,用免疫組織化學(xué)和激光共聚焦鑒定移植的神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)的存活與分化情況。 結(jié)果：1)建立了穩(wěn)定高效的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞分化體系；2)分化得到的Rosettes結(jié)構(gòu)神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)bFGF/EGF擴(kuò)增后,能夠較好的維持其Rosettes結(jié)構(gòu)；3)神經(jīng)干細(xì)胞移植到兩只獼猴腦內(nèi)后兩個月,發(fā)現(xiàn)移植細(xì)胞能夠較好的存活,并向神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化。 結(jié)論：經(jīng)bFGF/EGF擴(kuò)增培養(yǎng)獼猴胚胎干細(xì)胞能較好的維持神經(jīng)干細(xì)胞的Rosettes結(jié)構(gòu)(真正意義上的早期全能神經(jīng)前體細(xì)胞)；擴(kuò)增培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞移植到兩只獼猴腦內(nèi)后能維持其特性,為將來神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用于臨床提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。 第二部分 神經(jīng)干細(xì)胞移植對腦外傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)、細(xì)胞凋亡及凋亡基因表達(dá)的影響 目的：觀察神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)移植對腦損傷大鼠神經(jīng)功能及細(xì)胞凋亡的影響,探討其分子機(jī)制。 方法：24只SD大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組、手術(shù)組和NSCs移植組。采用自由落體致大鼠皮質(zhì)運(yùn)動區(qū)腦損傷模型,NSCs于術(shù)后當(dāng)天移植入腦損傷大鼠挫傷位周圍4個點(diǎn)；術(shù)后觀察大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)情況,移植的NSCs在腦組織存活、遷移及細(xì)胞凋亡、抗凋亡基因表達(dá)情況。 結(jié)果：NSCs移植后NSS評分至第7天明顯比對照組下降,說明NSC移植對腦外傷大鼠神經(jīng)功能有改善作用。移植NSCs能在宿主腦組織存活,并向四周遷移；凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯減少；而抗凋亡基因BCL-XL表達(dá)明顯增加,與未移植NSCs的單純手術(shù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：NSCs能改善腦損傷大鼠神經(jīng)功能,其機(jī)制可能與NSCs在體內(nèi)存活、能夠減少細(xì)胞凋亡和增加抗凋亡基因BCL-XL表達(dá)有關(guān)。 第三部分 適用神經(jīng)干細(xì)胞移植研究的青光眼視神經(jīng)損傷模型的建立 目的：探索一種能夠適用于干細(xì)胞移植研究的青光眼造模方法,為神經(jīng)干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究奠定模型基礎(chǔ)。 方法：本實驗采用對新西蘭白兔球結(jié)膜下注射地塞米松注射液的方式給藥,2.5mg/次,一周3次(間隔一天給藥),持續(xù)8周。 結(jié)果：眼底照相觀察到造模眼眼球屈光間質(zhì)保持清晰,視乳頭凹陷明顯擴(kuò)大、血管呈屈膝狀；病理切片顯示造模眼視神經(jīng)受到明顯損傷；海德堡視網(wǎng)膜斷層掃描儀(Heidelberg Retina Tomography, HRT)定量分析顯示造模眼呈現(xiàn)盤沿面積減小1.10±0.88mm2、杯/盤比增大0.17±0.13,以及視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層平均厚度降低0.44±0.31mm的青光眼性質(zhì)病理改變,均達(dá)到極顯著水平(p0.001)。 結(jié)論：1)本實驗建立了一種簡單可靠、重復(fù)性強(qiáng)的慢性青光眼視神經(jīng)損傷的造模方法；2)造模眼眼壓波動輕微,不會影響移植細(xì)胞的生長,眼底照相觀察到造模眼眼球屈光間質(zhì)保持清晰,適合觀察神經(jīng)干細(xì)胞移植后情況,此造模方法適用于干細(xì)胞移植研究。 第四部分兔青光眼視神經(jīng)損傷后移植神經(jīng)干細(xì)胞的探索研究 目的：探索青光眼視神經(jīng)損傷后移植神經(jīng)干細(xì)胞具體可行性。 方法：青光眼視神經(jīng)損傷模型建立后,以不同的移植方法雙眼(模型眼及對照眼)注入獼猴神經(jīng)干細(xì)胞,植入5個月后,摘取眼球,采用不同標(biāo)本制作方法,固定、切片,通過共聚焦顯微鏡觀察神經(jīng)干細(xì)胞生長存活情況,并觀察其在眼內(nèi)遷移及與視網(wǎng)膜整合情況,移植后眼內(nèi)反應(yīng)等。 結(jié)果：青光眼視神經(jīng)損傷兔眼(模型眼)玻璃體內(nèi)可見存活的神經(jīng)干細(xì)胞,未見神經(jīng)干細(xì)胞遷移及與視網(wǎng)膜整合,對照眼未見神經(jīng)干細(xì)胞存活；此結(jié)果與移植方法、標(biāo)本制作方法及免疫反應(yīng)有關(guān)。 結(jié)論：獼猴神經(jīng)干細(xì)胞能夠在青光眼視神經(jīng)損傷的兔眼玻璃體內(nèi)長時間存活并生長,為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ),進(jìn)一步證實了本實驗第三部分的造模方法適合用于神經(jīng)干細(xì)胞移植的研究；神經(jīng)干細(xì)胞玻璃體移植后未見向視網(wǎng)膜遷移整合,提示對神經(jīng)干細(xì)胞眼內(nèi)注入方法需進(jìn)一步改良研究；僅在模型眼(注射地塞米松)觀察到神經(jīng)干細(xì)胞玻璃體存活生長,對照眼未見,且有眼內(nèi)反應(yīng)現(xiàn)象,為下一步研究神經(jīng)干細(xì)胞眼內(nèi)移植后如何控制免疫排斥反應(yīng)提供了思路。 第五部分 單側(cè)青光眼視神經(jīng)損傷后眼外肌及其本體感受器病理學(xué)改變 目的研究單側(cè)青光眼視神經(jīng)損傷后間歇性斜視(知覺性)患者眼外肌及其本體感受器的超微結(jié)構(gòu),以期了解青光眼視神經(jīng)損傷患者眼運(yùn)動系統(tǒng)的病理變化及探討其發(fā)病機(jī)制,推進(jìn)對青光眼神經(jīng)疾病的認(rèn)識,并為后續(xù)研究神經(jīng)干細(xì)胞移植提供組織形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 方法選取10例單側(cè)青光眼視神經(jīng)損傷后間歇性(知覺性)外斜視患者非注視眼內(nèi)直肌附著點(diǎn)后長約4-5mm,寬約1Omm的眼外肌作為實驗組(光鏡10例、透射電鏡10例),選取10例同期角膜移植供體的健康人眼內(nèi)直肌作為正常對照組(光鏡5例、透射電鏡5例),制作病理標(biāo)本,光鏡及透射電鏡下觀察比較2組肌纖維及眼外肌本體感受器的超微結(jié)構(gòu)差異。 結(jié)果同正常對照組比較,單側(cè)青光眼視神經(jīng)損傷后間歇性(知覺性)外斜視患者眼外肌纖維排列紊亂,部分纖維萎縮、水腫,線粒體變性,眼外肌本體感受器結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯異常,內(nèi)外膜不完整,梭內(nèi)肌纖維排列紊亂,有髓神經(jīng)軸漿內(nèi)有殘體形成,線粒體缺如,內(nèi)膜與Schwann細(xì)胞間可見粗大致密的膠原纖維增生,神經(jīng)纖維內(nèi)微絲、微管等細(xì)胞器減少,嚴(yán)重者可見有髓神經(jīng)脫髓鞘。 結(jié)論單側(cè)青光眼視神經(jīng)損傷后眼外肌內(nèi)直肌及其本體感受器發(fā)生了病理性改變,即眼運(yùn)動神經(jīng)通路的效應(yīng)器出現(xiàn)了異常改變。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R329
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮寫詞表
研究背景
    參考文獻(xiàn)
第一部分 獼猴胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化、干性維持及腦內(nèi)移植
    引言
    材料及方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 神經(jīng)干細(xì)胞移植對腦外傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)、細(xì)胞凋亡及凋亡基因表達(dá)的影響
    引言
    材料及方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 適用神經(jīng)干細(xì)胞移植研究的青光眼視神經(jīng)損傷模型的建立
    引言
    材料方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 兔青光眼視神經(jīng)損傷后移植神經(jīng)干細(xì)胞的探索研究
    引言
    材料及方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第五部分 單側(cè)青光眼視神經(jīng)損傷后眼外肌及其本體感受器病理學(xué)改變
    引言
    材料及方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
本課題的創(chuàng)新點(diǎn)及其意義
綜述
    參考文獻(xiàn)
博士在讀期間發(fā)表論文
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 張莉莉，蔡玲玲，林久治，張偉，吳婉芳;大鼠缺氧缺血性腦病模型實驗治療的病理觀察[J];北京中醫(yī);1995年03期

2 柳浩然;楊長虹;薄巍巍;黃勤;高俊瑋;羅湘穎;陳楓華;伍軍;方加勝;;神經(jīng)干細(xì)胞移植對大鼠視神經(jīng)部分損傷后視覺誘發(fā)電位的影響[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2006年08期

3 田增民,李志超,尹豐,李士月,劉爽;人神經(jīng)干細(xì)胞移植治療小腦萎縮[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年09期

4 李榮榮;陳洪偉;陳棟梁;王淑芬;張敬;陳銳;季維智;;肝細(xì)胞生長因子促進(jìn)獼猴胚胎干細(xì)胞來源的神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖[J];動物學(xué)研究;2008年05期

5 田潔;李根林;;視網(wǎng)膜下腔免疫赦免研究進(jìn)展[J];國際眼科縱覽;2006年04期

6 黃文志;唐羅生;;神經(jīng)干細(xì)胞移植術(shù)治療視網(wǎng)膜退行性疾病[J];國際眼科雜志;2007年06期

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9 劉永生,宋來君,龐長河,郝燕燕,龍江;神經(jīng)干細(xì)胞移植對大鼠視神經(jīng)損傷后視覺電生理的影響[J];實用神經(jīng)疾病雜志;2005年01期

10 顧峻;顧紅玉;陳玉英;何正瑞;丁文龍;;MK-801對新生大鼠腦外傷后神經(jīng)元凋亡的影響[J];解剖學(xué)雜志;2006年06期

本文編號：2835539