【摘要】：背景與目的：多種病毒可以感染卵巢,影響卵巢功能。而且一些病毒如乙型肝炎病毒(HBV)、及艾滋病毒(HIV)等可能通過感染卵細(xì)胞和胚胎而直接傳播給后代。然而卵巢、卵細(xì)胞及胚胎的天然抗病毒機(jī)制,尚未研究。本論文旨在分析模式識別受體介導(dǎo)的卵巢及早期胚胎的天然抗病毒反應(yīng)。 材料與方法：免疫組化和Western blotting方法用于蛋白的定位與定量分析。Real-time RT-PCR用于分析mRNA表達(dá)水平分析。ELISA方法用來分析細(xì)胞因子的濃度。分離小鼠顆粒細(xì)胞、卵細(xì)胞、卵黃囊細(xì)胞,通過轉(zhuǎn)染Poly(I:C)模擬病毒感染,分析細(xì)胞的天然抗病毒反應(yīng)。 結(jié)果：病毒RNA模式識別受體TLR3、MDA5、RIG-1在卵巢顆粒細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。Poly(I:C)可以誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞的天然抗病毒反應(yīng),包括上調(diào)TNF-α、IL-6、 IFN-α、IFN-β等炎癥因子,以及抗病毒蛋白ISG15、OAS1、Mx1的表達(dá)。抑制TLR3、MDA5、RIG-I中任一個受體表達(dá)顯著地降低了上述反應(yīng)。顆粒細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)干擾雌激素的合成。而且MDA5、RIG-I表達(dá)于卵母細(xì)胞及成熟的卵細(xì)胞,Poly(I:C)誘導(dǎo)卵細(xì)胞抗病毒蛋白ISG15、OAS1表達(dá)上調(diào)。在胚胎發(fā)育早期,TLR3、MDA5、RIG-I受體特異表達(dá)于卵黃囊細(xì)胞,Poly(I:C)可誘導(dǎo)卵黃囊細(xì)胞產(chǎn)生天然抗病毒反應(yīng)。Poly(I:C)誘導(dǎo)的天然抗病毒反應(yīng)需要TLR3、MDA5、RIG-I受體介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)與干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)的活化。 結(jié)論：卵巢顆粒細(xì)胞與卵細(xì)胞表達(dá)TLR3、MDA5、RIG-I受體,并可介導(dǎo)天然抗病毒反應(yīng),卵巢的抗病毒反應(yīng)干擾其自身的激素分泌功能。在早期胚胎發(fā)育過程,天然抗病毒機(jī)制主要存在于卵黃囊中。結(jié)果表明,卵巢顆粒細(xì)胞、卵細(xì)胞及胚胎卵黃囊中具有天然抗病毒活性。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語表
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1.實(shí)驗(yàn)動物
    2.細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑
    3.分子生物學(xué)相關(guān)試劑
    4.免疫組化和免疫突光實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
    5.其它試劑
    6.Real time PGR 引物
    7.分子量標(biāo)準(zhǔn)
    8.主要儀器設(shè)備及材料
    9.圭要軟件
    10.主要溶液配方
實(shí)驗(yàn)方法
    1.基因敲除小鼠的繁殖及鑒定
    2.小鼠的繁殖、超排處理與交配
    3.組織形態(tài)學(xué)觀察
    4.細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
    5.細(xì)胞免疫焚光染色
    6.免疫突光染色檢測NF-kB的轉(zhuǎn)位
    7.實(shí)時定量 PCR (Quantitaitve real time PGR)
    8.Western Blotting 實(shí)驗(yàn)
    9.應(yīng)用ELISA法定量檢測細(xì)胞因子
    10.統(tǒng)計學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    第一部分：Poly(I:C)誘導(dǎo)的卵巢抗病毒反應(yīng)
    第二部分：病毒模式識別受體在卵細(xì)胞中的表達(dá)與功能
    第三部分：胚胎卵黃囊的抗病毒免疫反應(yīng)
討論
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
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發(fā)表文章
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;A winning war against hepatitis B virus infection in China[J];Chinese Medical Journal;2007年24期

本文編號：2827880