宿主細(xì)胞進(jìn)化出了許多非特異性防御機(jī)制,其在受到外界病原體攻擊后會(huì)立刻啟動(dòng)并發(fā)揮作用。病毒感染后,宿主防御系統(tǒng)被激活,轉(zhuǎn)錄激活一系列效應(yīng)因子參與細(xì)胞凋亡,炎癥反應(yīng),細(xì)胞增殖與DNA損傷修復(fù),抑制病毒復(fù)制同時(shí)維持自身遺傳穩(wěn)定性。最近十幾年研究中發(fā)現(xiàn),在病毒感染的真核宿主細(xì)胞中產(chǎn)生了許多病毒來源的小RNA分子,這些RNA分子與宿主內(nèi)源的小干擾RNA(siRNAs)、微小RNA (miRNAs)以及Piwi結(jié)合RNAs (piRNAs)具有相似的特性,因此能夠誘導(dǎo)RNA沉默途徑從而降解病毒相關(guān)mRNA產(chǎn)生特異的抗病毒免疫。為了對(duì)抗宿主的防御系統(tǒng),病毒也進(jìn)化出多種機(jī)制來抑制這些抗病毒信號(hào)事件,從而維持自身的穩(wěn)定感染。病毒的基因組較小,一般編碼能力有限,特別是RNA病毒和較小的DNA病毒如乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)。病毒編碼的蛋白分為結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,病毒結(jié)構(gòu)蛋白存在于病毒粒體之中,參與病毒粒體裝配、成熟、入侵以及病毒復(fù)制過程,而非結(jié)構(gòu)蛋白一般參與病毒基因組復(fù)制的調(diào)控以及免疫致病過程,常常被稱為調(diào)控蛋白(regulatory proteins)。過去對(duì)病毒對(duì)抗宿主細(xì)胞防御反應(yīng)的研究多數(shù)圍繞病毒編碼的調(diào)控蛋白,而對(duì)病毒結(jié)構(gòu)蛋白關(guān)注較少。病毒衣殼蛋白(capsid)為病毒基因組結(jié)合蛋白,是所有病毒共有的結(jié)構(gòu)蛋白。本研究選擇兩種主要醫(yī)學(xué)病毒的衣殼蛋白作為研究對(duì)象,即HBV的核心蛋白(core)和嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS coronavirus, SARS-CoV)的N蛋白,分別發(fā)現(xiàn)HBV核心蛋白的前蛋白(precore)及其剪切體能夠抑制病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)p53穩(wěn)定性,SARS-CoV的N蛋白能夠抑制宿主細(xì)胞的RNA沉默途徑,保護(hù)病毒RNA不被降解。這些機(jī)制的發(fā)現(xiàn)揭示了病毒結(jié)構(gòu)蛋白或其前體分子在病毒對(duì)抗宿主細(xì)胞抗病毒反應(yīng)和致病過程中的重要性,為深入了解相關(guān)病毒復(fù)制與致病機(jī)制提供了新的知識(shí)。1.HBV病毒編碼的precore蛋白及其剪切體抑制細(xì)胞凋亡與p53穩(wěn)定性HBV感染能夠引起急性或慢性肝炎,并逐步肝硬化,是肝癌發(fā)生的重要誘因。p53功能失活是肝癌發(fā)生過程中主要的事件,在本研究中,我們擬研究HBV核心蛋白與其前蛋白precore在HBV抵御細(xì)胞抗病毒反應(yīng)與致病中的作用。利用酵母雙雜交系統(tǒng)和多種生化和細(xì)胞生物學(xué)方法證明HBV precore與Numb相互作用,其相互作用能夠影響p53的轉(zhuǎn)錄活性,促進(jìn)細(xì)胞增長(zhǎng),抑制p53依賴的細(xì)胞凋亡。另外,穩(wěn)定表達(dá)precore及其剪切體的HepG2細(xì)胞系中p53蛋白的穩(wěn)定性被下調(diào)。最后,我們揭示了precore調(diào)控p53活性與肝細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制：precore蛋白通過與Numb相互作用,增強(qiáng)MDM2與p53結(jié)合并將其泛素化,促進(jìn)p53進(jìn)入蛋白酶體降解途徑,從而下調(diào)了p53在細(xì)胞中的穩(wěn)定性。2.SARS冠狀病毒編碼的核衣殼蛋白N抑制RNA沉默途徑植物病毒與無脊椎動(dòng)物病毒通常需要編碼一種蛋白來抵御宿主的基于RNA沉默的抗病毒機(jī)制,許多植物病毒編碼的RNA沉默抑制因子已經(jīng)被報(bào)道,但是哺乳動(dòng)物病毒編碼的該功能蛋白卻研究的很少。本研究中發(fā)現(xiàn)SARS冠狀病毒編碼的核衣殼蛋白N可能是一種潛在的RNA沉默抑制因子。N蛋白能夠抑制shRNA誘導(dǎo)的RNA沉默,同時(shí)對(duì)siRNA誘導(dǎo)的RNA沉默也有抑制作用,N蛋白很可能是通過與雙鏈RNA結(jié)合阻止Dicer對(duì)雙鏈RNA的剪切,進(jìn)而抑制siRNA形成發(fā)揮沉默抑制子的功能。對(duì)于擁有30 Kb基因組的SARS冠狀病毒而言,這種抵抗宿主RNA沉默途徑的策略很可能對(duì)于其復(fù)制轉(zhuǎn)錄以及保護(hù)基因組RONA是至關(guān)重要的。
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R373
【部分圖文】：

逑（二）在體內(nèi)研究ｐｒｅｃｏｒｅ蛋白對(duì)Ｎｕｍｂ，ｐ５３，邋ＭＤＭ２相互作用的影響。逡逑如圖４．６圖Ａ巧示，在ＷＣＬ檢測(cè)Ｉｎｐｕｔ樣品的實(shí)驗(yàn)中，隨著ｐｒｅｃｏｒｅ蛋白表逡逑達(dá)量增加，ｐ５３蛋白表達(dá)水平減少，Ｎｕｍｂ與ＭＤＭ２蛋白表達(dá)量沒有變化，這與逡逑結(jié)果４．３穩(wěn)定表達(dá)ｐｒｅｃｏｒｅ及其剪切體的細(xì)胞系中得到的結(jié)果一敢即ｐｒｅｃｏｒｅ蛋逡逑白下調(diào)ｐ５３的蛋白表達(dá)水平，但不影響Ｎｕｍｂ的蛋白表達(dá)水平。在免疫共沉淀的逡逑實(shí)驗(yàn)中，隨著ｐｒｅｃｏｒｅ蛋白水平X椉櫻危酰恚庥耄星珊停穡潁澹悖錚潁宓南嗷プ饔眉躒�，辶x險(xiǎn)庥脛霸諤逋庀嗷プ饔梅治鮒械玫降慕峁恢?jǐn)n牽穡擔(dān)秤耄停模停駁南嗷プ饔緬義弦渤氏種鸞ゼ躒醯那魘�，这更x峁此樸胩逋獾慕峁�，晤U欠治觶捎冢穡潁澹悖錚潁邋義系鞍啄芄揮跋歟穡擔(dān)車鞍椎謀澩鎪劍庠謔笛櫓幸駁牡攪頌逑鄭虼嗽誆患擁鞍族義廈柑逡種萍戀那榭魷卵芯肯赴冢穡擔(dān)秤耄停模停駁南嗷プ饔貌⒉豢煽�，因此晤U羌渝義先氳鞍酌柑逡種萍烈種疲穡擔(dān)吃諳赴械姆核鼗到饌綺

本文編號(hào)：2826599