目的：利用嬰幼兒血管瘤（IH）干細(xì)胞（HemSC）聯(lián)合臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）結(jié)合肌注雌激素,探索構(gòu)建血管瘤裸鼠模型的新方法，研究雌激素（17β-雌二醇，E2）對(duì)血管瘤的作用機(jī)制，探討Notch信號(hào)通路在血管瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的調(diào)控作用。 方法：使用CD133免疫磁珠分選方法，從增殖期IH組織中分選出HemSC，采用多向分化實(shí)驗(yàn)，證實(shí)其多向分化能力。對(duì)體外培養(yǎng)的HemSC分別給予10-9M、10-8M、10-7M、10-6M及10-5M濃度的E2作用48～72h，通過MTT實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Elisa)、反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)和免疫印跡(Western blotting)，研究E2對(duì)HemSC的增殖以及對(duì)FGF2、VEGF-A、雌激素受體（estrogen receptor ERα）、Notch基因家族受體Notch1及配體Jagged1影響，來探討E2的作用機(jī)制。將HemSC與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）聯(lián)合注入BALB/c-nu裸鼠皮下，隨機(jī)分為5組，每組4只，每周注射1次不同劑量（0、0.01mg/只、0.1mg/只、1mg/只）的17β-雌二醇（100μLDMSO溶解），不加藥物組肌肉注射DMSO100μL/只作為對(duì)照組，不加藥物也不注射DMSO組作為空白對(duì)照組，進(jìn)行He染色，測定微血管密度(MVD)，并以免疫組織化學(xué)方法證實(shí)。 結(jié)果：使用磁珠分選技術(shù)，可從IH組織中分選出HemSC，雖比例很低，但具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的多向分化能力。與HUVEC聯(lián)合注射并結(jié)合肌注E2，能夠形成更多的微血管。隨著E2濃度的不斷升高，MVD也逐漸增大，而且血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化的時(shí)間也相應(yīng)延長。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)E2濃度為10-9M～10-6M時(shí)，能夠明顯促進(jìn)HemSC增殖。高于10-6M后,HemSC的增殖變得不明顯。E2能明顯促進(jìn)HemSC表達(dá)VEGF-A、FGF2mRNA和蛋白，基因與蛋白的表達(dá)與濃度梯度呈線性關(guān)系。免疫組織化學(xué)染色示，ERα及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（Glut-1）在IH組織中高表達(dá)。HemSC中，Notch基因家族Notch1及配體Jagged1，隨E2濃度的增高而表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論：將HemSC和HUVEC混合注入BALB/c-nu裸鼠皮下，結(jié)合肌注10-6M E2，能夠更好地構(gòu)建血管瘤動(dòng)物模型，增加MVD。E2能夠有效促進(jìn)HemSC增殖，并抑制其向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在HemSC分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞的過程中起到了重要的調(diào)控作用。ERα對(duì)Notch信號(hào)通路中受體Notch1及配體Jagged1具有調(diào)控作用，雌激素受體可能通過對(duì)Notch信號(hào)通路的調(diào)控，來影響HemSC分化為其他細(xì)胞的能力。雌激素促血管生成的作用主要通過上調(diào)VEGF-A、FGF2的表達(dá)，使兩者協(xié)同而實(shí)現(xiàn)。這一結(jié)果將幫助我們更好地理解血管瘤發(fā)病的分子機(jī)制。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R732.2;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2822762