研究背景及目的 輸血是挽救人類(lèi)生命的重要手段,輸血前對(duì)血液進(jìn)行一系列生物學(xué)篩查和安全性評(píng)價(jià),對(duì)保障安全用血和生命健康具有重要意義。目前我國(guó)輸血前血液篩查大多仍采用傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)檢測(cè)血液中的病原生物及其成分。近年來(lái)隨著檢測(cè)試劑盒靈敏度的不斷提高,經(jīng)輸血傳播病原微生物的危險(xiǎn)性已經(jīng)處于較低水平。然而,由于病毒感染者“窗口期”獻(xiàn)血、隱匿性感染現(xiàn)象與病毒變異的存在,病毒反應(yīng)性(陽(yáng)性)獻(xiàn)血者的漏檢問(wèn)題依然存在,輸血或輸注血液制品仍有一定的傳播病毒的殘余風(fēng)險(xiǎn),對(duì)接受輸血者的生命安全造成極大危害。因此探索新的血液篩查方法,采用更加敏感特異方法消除漏檢,對(duì)于增強(qiáng)輸血及血液制品安全性具有重要的實(shí)際意義。 乙型肝炎是由感染乙型肝炎病毒(HBV)引起的乙類(lèi)傳染病。我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū),一般人群HBV感染率高達(dá)57.6%,HBV攜帶率高達(dá)9.09%,HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)陰性的隱匿性HBV感染在我國(guó)普遍存在。HBV感染可引起肝硬化和肝癌,嚴(yán)重危害機(jī)體健康和生命安全。因此在輸血前血液安全篩查中,乙型肝炎抗原及核酸成分的檢測(cè)就成為主要靶點(diǎn)。 利用ELISA檢測(cè)HBsAg是應(yīng)用最早,開(kāi)展最廣的檢測(cè)方法,但由于該技術(shù)是利用酶催化底物顯色的方法,靈敏度較低,操作誤差大,易出現(xiàn)假反應(yīng)性或假非反應(yīng)性,給血液安全檢測(cè)帶來(lái)不確定性。目前我國(guó)地市級(jí)血站系統(tǒng)采用由雙人兩次通過(guò)ELISA法檢測(cè)HBV的方法以減少誤差,但實(shí)際上此方法僅僅是增加了檢測(cè)的次數(shù),雖可減少操作者方面的實(shí)驗(yàn)誤差,但不能避免因加樣、洗板、變異系數(shù)較大等引起的方法學(xué)上的固有誤差。 近年來(lái),核酸檢測(cè)技術(shù)(NAT, Nucleic Acid Test)在輸血前血液篩查中的應(yīng)用受到高度關(guān)注。NAT是直接檢測(cè)病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱(chēng),利用該技術(shù)可在病毒感染后數(shù)天后即能檢出標(biāo)本中極微量的核酸,大大縮短“窗口期”。NAT敏感性高,與傳統(tǒng)的ELISA方法相比,雖然不能完全消除感染“窗口期”但由于病毒核酸轉(zhuǎn)陽(yáng)之前的血液傳染性極低,通過(guò)NAT檢測(cè),能夠明顯減少隱匿性感染和病毒變異株,最大限度地預(yù)防經(jīng)輸血傳播病毒性疾病,因此,NAT可使經(jīng)輸血傳播疾病的危險(xiǎn)性降到最低,有望成為一種新型的血液篩查傳染病的檢測(cè)技術(shù)。 隱匿性HBV感染(OBI)即血清HBsAg陰性而HBV-DNA陽(yáng)性的HBV感染,表現(xiàn)為病毒載量持續(xù)處于低水平復(fù)制狀態(tài)。OBI血液可以通過(guò)輸血導(dǎo)致受血者感染HBV,其感染率與各地區(qū)的HBV感染率和基因型相關(guān)。HBsAg陰性的隱匿性HBV感染在我國(guó)普遍存在,約有3%的正常人或獻(xiàn)血員為HBsAg陰性的HBV攜帶率者,在單一抗HBc陽(yáng)性人群中有30%-35%血清HBV DNA陽(yáng)性,是形成隱匿性乙肝病毒感染的基礎(chǔ)。 多種原因可能造成隱匿性HBV感染,位于aa124-147的“a”表位是HBsAg的免疫優(yōu)勢(shì)表位,是當(dāng)前HBsAg檢測(cè)的主要靶點(diǎn),HBsAg表位基因突變是導(dǎo)致HBsAg漏檢是最主要原因之一。有報(bào)道aa100-160氨基酸突變可引起HBsAg抗原活性的明顯改變。由于“a”表位也是乙肝疫苗的主要保護(hù)性表位以及抗乙肝免疫球蛋白的主要靶點(diǎn),“a”表位突變可使現(xiàn)有乙肝疫苗及診斷試劑的靈敏度下降,因此研究HBsAg "a"表位對(duì)應(yīng)的HBV S區(qū)基因序列具有特別重要的理論和實(shí)際意義。 本課題以省級(jí)血液中心為研究基地,選擇93613份無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)本,采用NAT、基因突變檢測(cè)和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)對(duì)血液中乙型肝炎病毒的核酸和抗原、抗體聯(lián)合檢測(cè),并與傳統(tǒng)的ELISA對(duì)比研究；對(duì)HBsAg酶聯(lián)免疫法檢測(cè)陰性但NAT檢測(cè)DNA陽(yáng)性的血清標(biāo)本進(jìn)行DNA序列分析和抗體蛋白的確認(rèn)與分型,探討HBsAg陰性血清模式與HBV DNA的關(guān)系,尋找窗口期和隱匿性HBV感染者；對(duì)隱匿性HBV感染者病毒株基因變異進(jìn)行分析,對(duì)病毒株的“a”表位區(qū)域進(jìn)行基因序列測(cè)定,分析“a”表位基因突變情況。 本論文旨在了解目前我國(guó)HBV篩查體系下獻(xiàn)血者隱匿性HBV感染及HBsAg突變株流行狀況,建立更為靈敏、準(zhǔn)確、符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)要求的輸血前血液篩查新模式,并根據(jù)篩查結(jié)果計(jì)算輸血傳播傳染性疾病的殘余風(fēng)險(xiǎn)。此外,本文還初步探討了肝癌細(xì)胞PI3K/PKB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)細(xì)胞凋亡抑制蛋白Survivin變化的影響,旨在為HBV密切相關(guān)的肝癌診斷及治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分輸血前應(yīng)用NAT大規(guī)模篩查乙肝病毒的模式構(gòu)建及應(yīng)用研究 研究方法： 1.核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室體系的構(gòu)建：按照衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》,建立標(biāo)準(zhǔn)核酸檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室,之后所有NAT檢測(cè)均在此實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。 2.不同采血點(diǎn)血液標(biāo)本的匯集和處理：將不同采血點(diǎn)冷鏈運(yùn)送來(lái)的標(biāo)本信息錄入采供血及臨床輸血管理網(wǎng)絡(luò)體系平臺(tái)。樣品處理：采用血清或抗凝血漿,離心后,取上清用于核酸檢測(cè)。收集的樣品置4℃保存,24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。 3.建立健全樣品采集-預(yù)處理-保存-使用的標(biāo)準(zhǔn)化流程。標(biāo)本離心后,經(jīng)全自動(dòng)加樣儀自動(dòng)讀取標(biāo)本條碼并加樣,生成加樣文件,發(fā)送至實(shí)驗(yàn)室服務(wù)器的相應(yīng)加樣數(shù)據(jù)目錄下,由全自動(dòng)酶免分析儀和核酸檢測(cè)儀處理,將其檢測(cè)結(jié)果相關(guān)數(shù)據(jù)發(fā)送至實(shí)驗(yàn)室服務(wù)器的相應(yīng)檢測(cè)數(shù)據(jù)目錄下,實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)(LIS)將對(duì)應(yīng)的加樣數(shù)據(jù)與檢測(cè)結(jié)果相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理后,生成每個(gè)標(biāo)本相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果釋放至血站信息管理系統(tǒng)(Blood Station Information Management System, BIS)。通過(guò)深孔板的同步留樣,避免人工誤差和傳統(tǒng)辮血留樣錯(cuò)誤,配以信息化的管理方式取代人工保存,保證血樣檢測(cè)結(jié)果的還原性。 4. ELISA法檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體：ELISA法采用雙抗原夾心法或雙抗體夾心法檢測(cè)相應(yīng)的抗體或抗原。最后在450/630nm處測(cè)讀吸光度值。按照試劑說(shuō)明書(shū)設(shè)立臨界值。檢測(cè)孔A值大于臨界值則為反應(yīng)性,否則為非反應(yīng)性。酶聯(lián)免疫法的操作嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,其中核心抗體檢測(cè)時(shí)用生理鹽水作1：30稀釋。 5.標(biāo)準(zhǔn)NAT檢測(cè)自動(dòng)化流程建立：初期采用半自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行測(cè)試,探索出試劑準(zhǔn)備、樣品核酸提取到檢測(cè)的適宜條件,最后形成樣品自動(dòng)匯集、檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化流程。配套條碼掃描,測(cè)試過(guò)程可全程監(jiān)控。 6.核酸測(cè)定：采用合并檢測(cè)方式進(jìn)行。選擇ALT陰性,ELISA測(cè)定HBsAg陰性、抗HCV Ab陰性、抗HIV Ab陰性的樣品以及僅1種ELISA試劑為陰性的標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV和HIV病原體核酸的檢測(cè)。初篩檢測(cè)方式為合并檢測(cè)(6個(gè)樣本混合)。當(dāng)合并檢測(cè)匯集池樣品中HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA任何1項(xiàng)為反應(yīng)性時(shí),對(duì)該匯集池樣品再進(jìn)行拆分檢測(cè),挑選出對(duì)應(yīng)的單份反應(yīng)性樣品。合并檢測(cè)方式同時(shí)需滿足單份樣品臨床檢測(cè)的敏感性要求。 7.NAT體系的方法學(xué)評(píng)價(jià)：采用衛(wèi)生部臨檢中心及國(guó)際血篩標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)檢測(cè)結(jié)果的有效性進(jìn)行評(píng)估。當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差時(shí),立即停止試驗(yàn),查明原因后再繼續(xù)進(jìn)行,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確有效。使用該體系對(duì)本中心近30000份樣本進(jìn)行連續(xù)檢測(cè),有效評(píng)估實(shí)驗(yàn)整體的性能及穩(wěn)定性。 3.8復(fù)檢及確認(rèn)：所有ELISA非反應(yīng)性,NAT反應(yīng)性標(biāo)本都將備份管寄送至中國(guó)衛(wèi)生部臨檢中心作HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA分項(xiàng)定量檢測(cè)。并對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行隨訪,以觀察是否為抗體檢測(cè)窗口期標(biāo)本。 3.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理分析采用SPSS10.0軟件進(jìn)行方差分析,Student't檢驗(yàn)來(lái)判斷差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05具有顯著性意義。 研究結(jié)果 1.NAT檢測(cè)模式和流程的設(shè)計(jì)：構(gòu)建了NAT大規(guī)模篩查乙肝病毒的檢測(cè)模式和流程。 2.NAT檢測(cè)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：93613份無(wú)償獻(xiàn)血的標(biāo)本中,經(jīng)ELISA篩查HBsAg、抗HCV和抗HIV-1/2非反應(yīng)性及僅1種ELISA試劑為非反應(yīng)性的標(biāo)本共91271份,經(jīng)NAT檢測(cè)其中有60例反應(yīng)性標(biāo)本,反應(yīng)性檢出率為0.066%。 3.NAT反應(yīng)性標(biāo)本定量檢測(cè)：NAT分項(xiàng)鑒別實(shí)驗(yàn)反應(yīng)性率為63.33%(38/60)在我國(guó)經(jīng)血傳播疾病病毒酶免試劑陰性核酸試劑陽(yáng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本中,以HBV為主,不同于國(guó)外HIV為主的流行模式。 4. HBV DNA反應(yīng)性標(biāo)本病毒含量分布：38例HBV DNA反應(yīng)性標(biāo)本中病毒含量20IU/ml的標(biāo)本28例,占73.68%；20～100IU/ml的標(biāo)本4例,占10.53%。 5.HBV檢測(cè)單試劑反應(yīng)分析：HBV38例單試劑反應(yīng)性樣本中,使用中國(guó)產(chǎn)試劑16例,使用美國(guó)雅培公司試劑22例；經(jīng)NAT確認(rèn)反應(yīng)性2例,為美國(guó)雅培公司試劑單試劑檢出。 6.血液篩查核酸檢測(cè)系統(tǒng)指標(biāo)：血液篩查核酸檢測(cè)系統(tǒng)的單項(xiàng)檢測(cè)靈敏度≥95%,單項(xiàng)檢測(cè)特異性≥95%,單項(xiàng)檢測(cè)檢測(cè)下限是50IU/ml,單項(xiàng)檢測(cè)下限檢出率≥95%。檢測(cè)通量≥300例樣本/每日。 第二部分HBsAg ELISA-/NAT+的HBV血清學(xué)模式和病毒變異分析 研究方法 1. HBV DNA提�。菏褂肣IAamp MinElute病毒核酸提取試劑盒提取血清標(biāo)本中病毒DNA。 2.PCR擴(kuò)增：PCR擴(kuò)增使用Prime STAR高保真DNA聚合酶在BIO-RAD IC-Cycler梯度PCR擴(kuò)增儀或PE2400PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行目的片段PCR擴(kuò)增。引物HBSSWF: AACATCAGGATTCCTAGGAC; HBSSWR:CCTTGTAAGTTGGCGAGAA; HBSS-F TTCATCCTGCTGCTATGCC; HBSS-R:ACGTTTGGTTTTATTAGGGTTC,擴(kuò)增產(chǎn)物理論上包含HBV pre-S和S區(qū)基因。50μl PCR反應(yīng)體系中加入5×Prime STARTM Buffer (Mg2+plus)10μl, dNTP Mixture(各2.5mM)4μl, Primer1(10μM)1μl, Primer2(10μM)1μl,上述提取的模板DNA2-4μl, Prime STARTM HS DNA Polymerase(2.5U/μl)0.5μl,滅菌蒸餾水加至50μl。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性2min。94℃變性30s,56℃退火30s,72℃延伸55s,共40個(gè)循環(huán)。72℃2min。反應(yīng)體系：10×buffer1.0μl, primer F1.0μl, R1.0μl, dNTP1.0μl, Taq0.4μl, ddH2O3.6μl, cDNA2.0μl。每輪PCR均設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照,以不同拷貝數(shù)的HBV標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照,敏感度為50copy/ml。PCR產(chǎn)物取2μl用2%瓊脂糖凝膠電泳觀察。 3.PCR產(chǎn)物純化：使用TBE緩沖液制作1.5%瓊脂糖凝膠,然后對(duì)目的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,載樣液中加入SYBR Green Ⅰ。對(duì)于擴(kuò)增產(chǎn)物量大(電泳條亮帶)的標(biāo)本擴(kuò)增50μl體系后電泳,對(duì)于擴(kuò)增產(chǎn)物量小的標(biāo)本擴(kuò)增100μl體系后電泳,使用膠純化試劑盒純化擴(kuò)增產(chǎn)物。 4.DNA測(cè)序：PCR產(chǎn)物克隆,質(zhì)粒抽提,使用Big Dye測(cè)序反應(yīng)試劑盒在ABI PRISM3730型全自動(dòng)DNA測(cè)序儀上進(jìn)行雙向測(cè)序。 5.HBV基因分型和序列分析：對(duì)擴(kuò)增陽(yáng)性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定和進(jìn)化分析,確定所攜HBV的基因型。 6.生物信息學(xué)軟件處理：測(cè)序結(jié)果采用ContigExpress、MEGA4生物信息學(xué)軟件進(jìn)行分析處理。測(cè)得基因片段序列與各基因型參比序列用Blast進(jìn)行同源列隊(duì),比較分析基因突變情況。 研究結(jié)果 1.HBV pre-S/S基因PCR擴(kuò)增結(jié)果：56例標(biāo)本中有41例標(biāo)本PCR擴(kuò)增不佳,僅有15例標(biāo)本PCR產(chǎn)物電泳均可看到1400bp的特異性條帶。大部分標(biāo)本擴(kuò)增產(chǎn)物量較小,特異性條帶較弱。 2.無(wú)償獻(xiàn)血者中隱匿性HBV感染情況及基因型分析：23例ELISA HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本和15例隱匿性HBV標(biāo)本經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增陽(yáng)性檢測(cè)基因型,結(jié)果顯示,C基因型在隱匿性HBV中的比例(80.0%)明顯高于在HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本中的比例(17.4%),p0.05。 3.隱匿性HBV感染者表面抗原S區(qū)基因突變分析：3株基因B型和12株基因C型的S區(qū)序列分析。有6例在該區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)了基因序列點(diǎn)突變,其中有3例為1個(gè)堿基點(diǎn)突變,3例發(fā)生2個(gè)位點(diǎn)的堿基點(diǎn)突變。12例HBV基因C型感染者有4例出現(xiàn)基因點(diǎn)突變,而另3例HBV基因B型感染者中,2例出現(xiàn)基因突變株。 4.HBV S基因“a”決定簇內(nèi)點(diǎn)突變分析：15例HBsAg ELISA-NAT+標(biāo)本測(cè)序結(jié)果表明“a”決定簇內(nèi)點(diǎn)突變較多,有6例標(biāo)本存在9個(gè)位點(diǎn)處的“a”決定簇內(nèi)堿基點(diǎn)突變,主要以A-C突變多見(jiàn)。 第三部分ELISA-/NAT+獻(xiàn)血者血液HBV抗原抗體確認(rèn)的研究 研究方法 1. HBsAg ELISA-/NAT+獻(xiàn)血者隨訪策略和隨訪流程的設(shè)計(jì)和建立 2.標(biāo)本采集及處理 3. ECLIA法檢測(cè)HBV抗體和抗原。 4.NAT檢測(cè) 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 研究結(jié)果 1. HBsAg ELISA-/NAT+獻(xiàn)血者隨訪策略和隨訪流程的設(shè)計(jì)和建立。 2. ELISA(-)NAT(+)獻(xiàn)血者隨訪：對(duì)60名ELISA(-), NAT(+)獻(xiàn)血者立即進(jìn)行隨訪,追蹤成功26人(34人次)。乙型肝炎病毒表面抗原轉(zhuǎn)陽(yáng)的有3人；HBV核酸轉(zhuǎn)陰的5人；乙型肝炎病毒表面抗原未轉(zhuǎn)陽(yáng)但核酸仍為反應(yīng)性的10人。 3.無(wú)償獻(xiàn)血者中HBV窗口期標(biāo)本追蹤檢測(cè)概況 4.HBsAg ELISA-/NAT+獻(xiàn)血者HBV抗體確認(rèn)。對(duì)將59人份核酸檢測(cè)陽(yáng)性血液標(biāo)本進(jìn)行乙肝“兩對(duì)半”檢測(cè),結(jié)果顯示,其中有1人HBsAg陽(yáng)性,HBcAb陽(yáng)性43人、HBsAb陽(yáng)性26人,HBcAb單陽(yáng)性13人。 5.抗-HBc的表達(dá)與乙型肝炎隱匿性感染的關(guān)聯(lián)研究：抗-HBc與HBV隱匿性感染有一定的相關(guān)性,抗-HBc不僅可以作為既往HBV感染的標(biāo)志,也可以提示隱匿性HBV感染的可能。 第四部分肝癌細(xì)胞survivin表達(dá)及bFGF的調(diào)控作用 研究方法 1.細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系(Bel-7402),培養(yǎng)基為含有10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基。每2-3天傳代一次。根據(jù)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)將培養(yǎng)的Bel-7402細(xì)胞進(jìn)行不同濃度,不同時(shí)間的bFGF或wortmannin處理。 2.細(xì)胞處理：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞1×105/ml,接種于培養(yǎng)瓶,待達(dá)到70%融合時(shí)換成無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液孵育過(guò)夜,使細(xì)胞同步化,然后按時(shí)間點(diǎn)和濃度點(diǎn)分組施加因素。 3.Western blot分析：將樣品加適量樣品懸浮緩沖液后,超聲破碎,離心取上清,考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度。用10%SDS-PAGE電泳后,將PAGE凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。加入一抗(PKB Ser473)進(jìn)行Western Blot。最后定影、顯影,分析結(jié)果。 4. RT-PCR檢測(cè)Bel-7402細(xì)胞中survivin的表達(dá)。提取細(xì)胞總RNA,設(shè)計(jì)survivin特異性引物,RT-PCR, PCR產(chǎn)物經(jīng)2%凝膠電泳,凝膠成像儀觀察結(jié)果并拍照。 5.細(xì)胞周期分析：收集消化的貼壁Bel-7402細(xì)胞,加入70%冷乙醇固定48h,PI染色,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)定熒光強(qiáng)度。CellQuest分析軟件進(jìn)行細(xì)胞周期DNA含量分析。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 研究結(jié)果 1.經(jīng)bFGF處理后肝癌細(xì)胞PKB活性變化 2.經(jīng)bFGF處理后肝癌細(xì)胞survivin mRNA表達(dá)的變化 3.PI3K抑制劑對(duì)bFGF誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞survivin mRNA表達(dá)的影響。 4. Wortmannin對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡和增殖的影響 研究結(jié)論： 1.在輸血前乙型肝炎病毒的血液篩查中,采用ELISA技術(shù)對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行初檢,NAT技術(shù)進(jìn)行復(fù)檢的模式,能夠?qū)?biāo)本進(jìn)行精確的定性檢測(cè),對(duì)窗口期的標(biāo)本和隱匿性肝炎標(biāo)本具有更強(qiáng)的檢出率。 2.目前常規(guī)血液篩查中檢測(cè)HBsAg為陰性的合格血液,仍然存在著窗口期漏檢和隱匿性乙肝感染,以隱匿性乙肝為主,病毒株多為C型,且存在著變異株,B型病毒株較少,但突變株較高,突變株可逃避現(xiàn)有的診斷試劑的篩查。 3.抗-HBc與HBV隱匿性感染有一定的相關(guān)性,抗-HBc不僅可以作為既往HBV感染的標(biāo)志,也可以提示隱匿性HBV感染的可能。在不具備開(kāi)展核酸檢測(cè)的地區(qū),可以開(kāi)展抗-HBc檢測(cè),以降低輸血風(fēng)險(xiǎn)。 4. bFGF通過(guò)依賴(lài)PI3K/PKB途徑調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞Survivin的轉(zhuǎn)錄活性,促進(jìn)其表達(dá),進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞凋亡,PI3K/PKB抑制劑wortmannin可抑制該作用,并導(dǎo)致survivin表達(dá)的下調(diào)。 創(chuàng)新點(diǎn) 1、以省級(jí)血液中心為基礎(chǔ),選擇93613例大樣本,對(duì)現(xiàn)有血液篩查模式下ELISA及NAT對(duì)HBV血液篩查的應(yīng)用價(jià)值和輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行對(duì)比研究。 2、成功構(gòu)建以核酸檢測(cè)技術(shù)組合酶聯(lián)免疫篩查技術(shù)的輸血前經(jīng)血傳播病毒性疾病的檢測(cè)模式來(lái)取代目前單一免疫學(xué)檢測(cè)模式,顯著降低經(jīng)血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。 3、首次研究了本地區(qū)HBV感染者HBV基因類(lèi)型的分布和變異株的基因序列,豐富了國(guó)內(nèi)HBV基因型分布的數(shù)據(jù),為乙肝疫苗研制和乙肝診斷試劑的改進(jìn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù),具有重要意義。 4、抗-HBc與HBV隱匿性感染有一定的相關(guān)性,抗-HBc不僅可以作為既往HBV感染的標(biāo)志,也可以提示隱匿性HBV感染的可能,在不具備開(kāi)展核酸檢測(cè)的地區(qū),開(kāi)展抗-HBc檢測(cè)可降低經(jīng)血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。 5.首次證實(shí)bFGF刺激Bel-7402細(xì)胞后,通過(guò)依賴(lài)PI3K/PKB途徑調(diào)節(jié)Survivin的轉(zhuǎn)錄活性,促進(jìn)其表達(dá),進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類(lèi)】：R392

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本文編號(hào)：2821906