本研究著重于對(duì)日本血吸蟲(Sj)雄蟲源性抗原候選疫苗分子的篩選鑒定和保護(hù)性免疫的研究，以及細(xì)胞因子對(duì)核酸疫苗免疫的調(diào)節(jié)研究二大部分。 為獲得Sj雄蟲特異性抗原疫苗候選分子，開展了Sj雄蟲天然組分抗原的分離鑒定及保護(hù)性免疫研究。采用SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)比較分析Sj雄性、Sj雌性的抗原組分，Western blot檢測(cè)組分蛋白的抗原性和性別特異性，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)估抗原的免疫保護(hù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Sj雄蟲可溶性抗原含一高豐度帶，為44.6kDa，Sj雌蟲可溶性抗原中未見類似帶。通過SDS-PAG膠切法，獲高純度44.6kDa蛋白。Western blot檢測(cè)44.6kDa蛋白具抗原性和雄蟲特異性，并誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生39.31％的減蟲率和41.98％的減卵率，與對(duì)照組比差異有顯著性(p＜0.001)。有關(guān)其抗雄蟲特異性免疫值得今后研究。 為尋找雄蟲抗原表位模擬肽分子，從表位分子水平構(gòu)建Sj新型疫苗，作者進(jìn)行了Sj雄蟲抗原表位模擬肽的篩選及其保護(hù)性免疫研究。用抗Sj雄蟲抗原的IgG篩選噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)，獲得多個(gè)陽性噬菌體克隆，Dot-ELISA鑒定其具有抗原性。用混和陽性噬菌體克隆免疫小鼠獲31.72％的減蟲率和51.54％的減卵率，與對(duì)照組比差異有顯著性(p＜0.001)，表現(xiàn)為抗Sj感染和抗生殖作用。 為發(fā)現(xiàn)雄蟲特異性的基因及其編碼的靶抗原分子，從基因水平揭 示V性別特異性差異，采用U雄蟲免疫血清篩選對(duì)成蟲CDNA文庫(kù)， 對(duì)部分陽性克隆的插入片段進(jìn)行 PCR鑒定及測(cè)序。結(jié)果獲得 11個(gè)陽 性克隆，通過互聯(lián)網(wǎng)進(jìn)行核著酸序列同源性分析，發(fā)現(xiàn)三個(gè)新基因， 百 分M、Cps和＃ps（GenBan 注冊(cè)號(hào)分別為AF519808、AF524896 和 AF517843入 它們的預(yù)測(cè)編碼蛋白可能為存在于胞漿和胞核內(nèi)的信 息傳遞分子，三個(gè)新基因是否為雄蟲性別特異性值得進(jìn)一步探討。對(duì) SfMA進(jìn)行了亞克隆及原核表達(dá)，并用表達(dá)產(chǎn)物免疫小鼠。結(jié)果獲得 SJ－MA原核表達(dá)的重組體，并在ECOli中高效表達(dá)。SDS－PAGE和 Western blot顯示融合蛋白為54．skDa具良好的抗原性。融合蛋白與 FCA混合免疫小鼠可誘導(dǎo)高滴度的特異性格G抗體，免疫組的減蟲率 及減卵率分別為34．29％與48．76凡 與對(duì)照組比差異有顯著性 （／0．001人表明新基因 SfMA表達(dá)蛋白能誘導(dǎo)小鼠抗 SJ的保護(hù)性 免疫，提示其作為U疫苗候選分子的潛在價(jià)值。 為研究細(xì)胞因子DNA對(duì)核酸疫苗免疫的調(diào)節(jié)，作者分別構(gòu)建了 小鼠 IFN個(gè)和小鼠幾對(duì)真核表達(dá)重組質(zhì)粒，并首次分別聯(lián)合 SJ組織 蛋白酶B DNA疫苗免疫小鼠，通過免疫酶組織化學(xué)技術(shù)觀察兩種質(zhì)粒 DNA在小鼠肌肉細(xì)胞的表達(dá)，通過減蟲率減卵率評(píng)估免疫保護(hù)性作用。 結(jié)果兩種細(xì)胞因子質(zhì)粒和 DNA疫苗在小鼠肌肉細(xì)胞分別同時(shí)表達(dá)，其 中 IFN一下白顯著增強(qiáng) DM疫苗的減蟲率（27．37％，P＜0，05），而幾一4 能顯著增強(qiáng)＊A疫苗的減蟲率不減卵率（43．200和 76．63O，／0，01）。 為研究 Th型和 ThZ型應(yīng)答優(yōu)勢(shì)分別對(duì) DNA疫苗免疫的調(diào)節(jié)奠定基 石出。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

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本文編號(hào)：2815565