衰老,同生長一樣,是細(xì)胞的重要生命現(xiàn)象之一。端粒具有穩(wěn)定染色體的功能,端粒長度是控制細(xì)胞衰老的“分子鐘”,是細(xì)胞衰老、死亡和癌變的重要標(biāo)志。 端粒酶和端粒蛋白對端粒長度具有調(diào)節(jié)作用。人端粒結(jié)合蛋白(telomere repeat binding factor1, TRF1)能夠以二聚體的形式通過其羧基端的myb結(jié)構(gòu)域與端粒DNA結(jié)合。強(qiáng)化端粒的有序結(jié)構(gòu),使其處于一種“關(guān)閉”狀態(tài),導(dǎo)致端粒酶無法接近端粒末端發(fā)揮作用。過表達(dá)的TRF1能使端粒長度逐漸縮短,它是端粒長度的負(fù)調(diào)節(jié)因子。同時(shí),長期過表達(dá)的端錨聚合酶(TRF1-interacting, ankyrin-related ADP-ribose polymerase, tankyrase)與TRF1分子結(jié)合后,通過其PARP活性對TRF1進(jìn)行聚ADP-核糖基化修飾,阻斷TRF1與端粒DNA的結(jié)合,從而解除TRF1對端粒長度的抑制作用,使端粒處于一種“開放”的狀態(tài),使端粒長度逐漸延長。因此tankyrase酶活性的調(diào)節(jié)及其與TRF1的相互作用可能是細(xì)胞內(nèi)調(diào)控端粒長度的重要方式。 TRF1具有核定位信號。是一個(gè)典型的核蛋白,而tankyrse則在胞漿和胞核都有分布,并且它在胞核的分布依賴于TRF1。它們是通過什么機(jī)制精細(xì)地調(diào)節(jié)端粒的長度?這一過程中是否還有其它分子對它們進(jìn)行修飾或調(diào)控?如果抑制tankyrase的蛋白表達(dá)水平,封閉其功能,阻斷它與TRF1之間的相互作用。是否會(huì)強(qiáng)化TRF1對端粒長度的負(fù)向調(diào)控功能?反之,如果抑制TRF1的表達(dá)水平是否會(huì)強(qiáng)化tankyrase的功能或是因?yàn)閠ankyrase的入核能力降低而削弱它的正向調(diào)節(jié)能力?所有的這些情況又將對細(xì)胞生長、端粒長度和細(xì)胞衰老產(chǎn)生怎樣的影響? 為了對上述問題進(jìn)行深入研究。我們的工作獲得如下結(jié)果: 1.通過RT-PCR從HeLa細(xì)胞中克隆得到TRF1蛋白編碼基因,誘導(dǎo)表達(dá)了帶His-tag的TRF1融合蛋白,用純化重組蛋白作為免疫原制備的兔抗血清能夠用于Western-blot和免疫熒光細(xì)胞染色檢測多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)源性TRF1分子。 2.通過穩(wěn)定過表達(dá)與tankyrase結(jié)合的TRF1氨基端68個(gè)氨基酸序列,建立了負(fù)顯性抑制tankyrase胞核功能的細(xì)胞模型。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R341

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2810530