狂犬病是由狂犬病毒感染引起的以侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)為特征的致死性人畜共患傳染病。用狂犬病毒疫苗進行預防注射是預防和控制狂犬病發(fā)生的有效途徑。狂犬病毒疫苗由早期的神經(jīng)組織疫苗逐步發(fā)展，目前廣泛采用原代細胞培養(yǎng)疫苗和傳代細胞精制純化疫苗，這些疫苗具有較好的免疫效果，但受生產(chǎn)成本昂貴，運輸和貯存必須依賴于低溫”冷鏈”，給藥方式等因素限制，不便應用于狂犬病毒的儲存宿主即犬、狐貍等各種野生或家養(yǎng)動物的免疫接種。有效免疫接種狂犬病毒的傳染源，切斷其傳播途徑有賴于發(fā)展新一代的基因工程重組疫苗。重組痘病毒載體和重組腺病毒載體具有宿主范圍廣，對外界環(huán)境有一定的抵抗能力，可口服誘導免疫等共同優(yōu)點，可被作為基因工程狂犬病毒疫苗的優(yōu)良載體，而與重組痘病毒狂犬病毒疫苗相比，重組復制缺陷型腺病毒狂犬病毒疫苗更為安全和有效，并能成功地克服在新生動物中可能存在的來自于母體的免疫干擾。研究和開發(fā)基于復制缺陷型腺病毒的重組狂犬病毒疫苗將有望有效預防，控制甚至根除我國狂犬病的發(fā)生。 狂犬病毒共有5種結構蛋白，其中糖蛋白(Glycoprotein，GP)和核蛋白(Nucleoprotein，NP)能有效激發(fā)機體產(chǎn)生保護性免疫反應。我們選用狂犬病毒CVS株腦腔接種后發(fā)病小鼠的腦組織，提取其總RNA，反轉錄合成cDNA后，用高保真PCR系統(tǒng)擴增病毒GP基因，將其克隆入質粒載體pUC18。對篩選所得的重組質粒進行GP全基因序列測定，以DNAStar MegAlign及GenBank BLAST進行序列對比分析的結果表明：成功地克隆了具有強神經(jīng)毒力的狂犬病毒CVS24毒株的變種(variant)CVS-N2c的GP基因，將這一結果在Genbank進行了注冊，登記號為：AF325714。CVS-N2c GP基因編碼區(qū)長1575bp，編碼524個氨基酸，與國內外發(fā)表的狂犬病毒疫苗株3aG株，ERA株，HEP-Flury株GP基因的核酸序列進行比較，同源性分別為89.0％，89.3％，94.5％，而推導的氨基酸順序同源性分別為87.6％，88.4％，91.2％。CVS-N2c GP基因克隆與我課題組先前克隆的aG株GP基因和aG株NP基因為重組腺病毒的構建提供了保護性抗原基因。
【學位單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2001
【中圖分類】：R392

【引證文獻】

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1 羅世民;狂犬病弱毒疫苗Flury-lep株生物學特性檢測與分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 趙娜;狂犬病病毒糖蛋白基因重組逆轉錄病毒的構建及其免疫原性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2010年

3 黎銘;狂犬病新型口服疫苗—糖蛋白表達質粒的構建以及表達細菌的篩選[D];廣西大學;2006年

4 王玉峰;狂犬病病毒糖蛋白重組偽狂犬病病毒載體構建及瞬時表達[D];吉林大學;2007年

5 廖曉征;N公司發(fā)展戰(zhàn)略研究[D];華南理工大學;2012年

本文編號：2810463