狂犬病是由狂犬病毒感染引起的以侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)為特征的致死性人畜共患傳染病。用狂犬病毒疫苗進(jìn)行預(yù)防注射是預(yù)防和控制狂犬病發(fā)生的有效途徑。狂犬病毒疫苗由早期的神經(jīng)組織疫苗逐步發(fā)展，目前廣泛采用原代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗和傳代細(xì)胞精制純化疫苗，這些疫苗具有較好的免疫效果，但受生產(chǎn)成本昂貴，運(yùn)輸和貯存必須依賴于低溫”冷鏈”，給藥方式等因素限制，不便應(yīng)用于狂犬病毒的儲(chǔ)存宿主即犬、狐貍等各種野生或家養(yǎng)動(dòng)物的免疫接種。有效免疫接種狂犬病毒的傳染源，切斷其傳播途徑有賴于發(fā)展新一代的基因工程重組疫苗。重組痘病毒載體和重組腺病毒載體具有宿主范圍廣，對(duì)外界環(huán)境有一定的抵抗能力，可口服誘導(dǎo)免疫等共同優(yōu)點(diǎn)，可被作為基因工程狂犬病毒疫苗的優(yōu)良載體，而與重組痘病毒狂犬病毒疫苗相比，重組復(fù)制缺陷型腺病毒狂犬病毒疫苗更為安全和有效，并能成功地克服在新生動(dòng)物中可能存在的來(lái)自于母體的免疫干擾。研究和開(kāi)發(fā)基于復(fù)制缺陷型腺病毒的重組狂犬病毒疫苗將有望有效預(yù)防，控制甚至根除我國(guó)狂犬病的發(fā)生。 狂犬病毒共有5種結(jié)構(gòu)蛋白，其中糖蛋白(Glycoprotein，GP)和核蛋白(Nucleoprotein，NP)能有效激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)。我們選用狂犬病毒CVS株腦腔接種后發(fā)病小鼠的腦組織，提取其總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA后，用高保真PCR系統(tǒng)擴(kuò)增病毒GP基因，將其克隆入質(zhì)粒載體pUC18。對(duì)篩選所得的重組質(zhì)粒進(jìn)行GP全基因序列測(cè)定，以DNAStar MegAlign及GenBank BLAST進(jìn)行序列對(duì)比分析的結(jié)果表明：成功地克隆了具有強(qiáng)神經(jīng)毒力的狂犬病毒CVS24毒株的變種(variant)CVS-N2c的GP基因，將這一結(jié)果在Genbank進(jìn)行了注冊(cè)，登記號(hào)為：AF325714。CVS-N2c GP基因編碼區(qū)長(zhǎng)1575bp，編碼524個(gè)氨基酸，與國(guó)內(nèi)外發(fā)表的狂犬病毒疫苗株3aG株，ERA株，HEP-Flury株GP基因的核酸序列進(jìn)行比較，同源性分別為89.0％，89.3％，94.5％，而推導(dǎo)的氨基酸順序同源性分別為87.6％，88.4％，91.2％。CVS-N2c GP基因克隆與我課題組先前克隆的aG株GP基因和aG株NP基因?yàn)橹亟M腺病毒的構(gòu)建提供了保護(hù)性抗原基因。
【學(xué)位單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 羅世民;狂犬病弱毒疫苗Flury-lep株生物學(xué)特性檢測(cè)與分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 趙娜;狂犬病病毒糖蛋白基因重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 黎銘;狂犬病新型口服疫苗—糖蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建以及表達(dá)細(xì)菌的篩選[D];廣西大學(xué);2006年

4 王玉峰;狂犬病病毒糖蛋白重組偽狂犬病病毒載體構(gòu)建及瞬時(shí)表達(dá)[D];吉林大學(xué);2007年

5 廖曉征;N公司發(fā)展戰(zhàn)略研究[D];華南理工大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2810463