【摘要】： 目的: 孢子絲菌病是皮膚科深部真菌病中較常見(jiàn)的一種,其致病菌為申克孢子絲菌,感染既可固定于皮膚也可以播散全身,對(duì)于免疫功能低下的患者,如艾滋病患者,感染�？刹ド⒅羶�(nèi)臟,甚至危及性命。申克孢子絲菌主要侵犯皮膚且多見(jiàn)于易受傷的暴露部位,主要分為皮膚型和皮膚外型。前者根據(jù)臨床表現(xiàn)不同可分為皮膚固定型、皮膚淋巴管型、皮膚播散型。申克孢子絲菌是雙相致病真菌,其在室溫下是菌絲相,體內(nèi)37℃為酵母相,致病相為酵母相。由于此菌為雙相真菌,加之臨床表現(xiàn)多樣,給申克孢子絲菌的致病機(jī)制的研究帶來(lái)很大困難,使其致病機(jī)制至今尚不清楚,處于研究探索階段。本研究通過(guò)對(duì)不同臨床型別申克孢子絲菌進(jìn)行DNA提取并隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)分析,通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及間接免疫熒光法觀察不同臨床型別申克孢子絲菌結(jié)合細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖維結(jié)合素能力的不同從分子水平來(lái)探討臨床型別不同的申克孢子絲菌株致病力的差別,為研究其致病機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法: 1、收集不同臨床型別孢子絲菌病的申克孢子絲菌分離株并提取DNA,進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)分析。 2、BALB/c小鼠接種不同臨床型別申克孢子絲菌懸液,觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)病及病變情況。. 3、發(fā)病小鼠皮膚組織病理學(xué)檢查,觀察接種不同臨床型別孢子絲菌病的菌懸液后小鼠病變部位申克孢子絲菌孢子數(shù)量及分布。 4、應(yīng)用間接免疫熒光技術(shù)觀察不同臨床型別申克孢子絲菌粘附細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖維結(jié)合素能力的差異。 結(jié)果: 1、不同臨床型別孢子絲菌病的申克孢子絲菌分離株聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物電泳帶型差異較明顯:皮膚淋巴管型分離株見(jiàn)1400bp\800bp\700bp\500bp,皮膚固定型分離株可見(jiàn)2500bp\1400bp\1000bp\700bp。 2、注射皮膚淋巴管型分離株的小鼠較注射固定型孢子絲菌病分離株小鼠皮損出現(xiàn)早、病變范圍廣且嚴(yán)重。 3、實(shí)驗(yàn)BALB/c小鼠病變皮膚組織病理學(xué)檢查顯示:注射皮膚淋巴管型分離株小鼠病變內(nèi)孢子數(shù)量較注射固定型孢子絲菌病分離株的小鼠病變內(nèi)孢子數(shù)量多。 4、免疫熒光測(cè)定結(jié)果:申克孢子絲菌酵母相與纖維結(jié)合素培養(yǎng)后,熒光延著細(xì)胞表面呈補(bǔ)丁樣分布,其中部分有鮮亮地?zé)晒狻Ｆつw淋巴管型的酵母相熒光較強(qiáng),皮膚固定型熒光微弱。說(shuō)明皮膚淋巴管型較皮膚固定型結(jié)合纖維結(jié)合素的能力強(qiáng)。對(duì)照組用兔正常血清代替先前抗體結(jié)果為陰性,證明了標(biāo)記的特異性。 結(jié)論: 通過(guò)對(duì)皮膚淋巴管型與皮膚固定型孢子絲菌病的申克孢子絲菌菌株多態(tài)性DNA(RAPD)分析、建立申克孢子絲菌感染的小鼠模型,表明二者雖然同屬于申克孢子絲菌,但基因有差異,臨床型別不同。通過(guò)間接免疫熒光檢測(cè)皮膚淋巴管型較皮膚固定型結(jié)合細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖維結(jié)合素的能力強(qiáng),可反映致病力不同。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R379
【圖文】：

二、RAPD擴(kuò)增來(lái)源于皮膚淋巴管型孢子絲菌病及固定型孢子絲菌病的分離株P(guān)CR產(chǎn)物電泳帶型明顯不同。見(jiàn)圖3圖3 不同 臨床型別 孢子絲菌 病的 申 克 孢子絲 菌 分離株 應(yīng) 用引物 OPBG-01和OPBG-14的 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果 M為 marker； 1： S1;2:S2;3:L1;4:L2;5:L3三、動(dòng)物發(fā)病及死亡情況第1組在足墊注射皮膚淋巴管型分離株后第7、9、10、12天各1只，第8、14、16天各有 2只小鼠足墊部位出現(xiàn)皮損。開(kāi)始紅腫、化膿、結(jié)痂，其中4 5 0 03 0 0 02 2 5 01 5 0 01 0 0 07 5 05 0 02 5 0

足墊注射皮膚淋巴管型分離株后10天，皮損內(nèi)平均每個(gè)視野可見(jiàn)到約70個(gè)孢子。足墊注射固定型分離株菌后10天，皮損內(nèi)平均每個(gè)視野可見(jiàn)到約40個(gè)孢子。見(jiàn)圖4-5圖4 足墊注射皮膚淋巴管型孢子絲菌病分離株菌懸液10天后足墊皮損變化,真皮內(nèi)較多圓形、橢圓形孢子（PAS染色，X400）

12圖5 足墊注射皮膚固定型孢子絲菌病分離株菌懸液10天后足墊皮損變化，真皮內(nèi)可見(jiàn)圓形、橢圓形孢子（PAS染色，×400）應(yīng)用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，第1組與第2組均數(shù)比較t=7.25,P<0.001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。六、免疫熒光測(cè)定結(jié)果申克孢子絲菌酵母相細(xì)胞加入纖維結(jié)合素培養(yǎng)后，熒光延著酵母細(xì)胞表面補(bǔ)丁樣分布，其中部分有鮮亮的熒光。皮膚淋巴管型熒光較強(qiáng)，皮膚固定型的熒光微弱。證明皮膚淋巴管型較皮膚固定型結(jié)合纖維結(jié)合素的能力強(qiáng)。對(duì)照組用兔正常血清代替先前抗體結(jié)果為陰性，證明了標(biāo)記的特異性。見(jiàn)圖6圖6:A示皮膚淋巴管型酵母相粘附纖維結(jié)合素似補(bǔ)丁樣標(biāo)記分布

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2802960