【摘要】：大量的實(shí)驗(yàn)證明:聚羥基脂肪酸酯(PHAs,polyhydroxyalkanoates)作為組織工程的支架材料具有優(yōu)越的應(yīng)用前景,間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs, Mesenchymal stem cells)在治療各種組織缺損和器官修復(fù)方面具有來(lái)源廣、分離易、無(wú)免疫性、增殖分裂能力強(qiáng),可以分化為神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等多種分化能力。本論文將由人臍帶沃頓膠質(zhì)組織(Wharton’s jelly)分離所得的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSCs, umbilical cord mesenchymal stem cells)植入到PHA生物材料家族的PHBHHx、P3HB4HB和PHBVHHx支架內(nèi),將UC-MSCs誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,通過(guò)CCK8方法檢測(cè)支架內(nèi)細(xì)胞的增殖能力,采用對(duì)生物材料物理性能的檢測(cè)確定各種材料的機(jī)械性能,采用Von Kossa和ALP染色法和RT-PCR分析法檢測(cè)UC-MSCs向成骨細(xì)胞的分化,并且比較這三種PHA生物材料支架在成骨組織工程中的應(yīng)用。 本論文將UC-MSCs植入PHBHHx、P3HB4HB和PHBVHHx支架內(nèi)培養(yǎng)不同的天數(shù),與在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)相比,支架對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用,并且,PHBVHHx對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用最強(qiáng)。通過(guò)對(duì)物理性能的檢測(cè)表明:在這三種PHA材料中,P3HB4HB的硬度最大,比較脆,PHBVHHx最軟,韌性最好,PHBHHx介于兩者之間。Von Kossa和ALP染色法顯示:在PHBHHx、P3HB4HB和PHBVHHx支架內(nèi),UC-MSCs能夠分化為成骨細(xì)胞,在支架內(nèi)可見黑色鈣沉淀和紅色堿性磷酸酶(alkaline phosphatase)的表達(dá)。采用RT-PCR方法檢測(cè)成骨分化特異性基因的表達(dá)也進(jìn)一步證明:這三種PHA材料能夠支持UC-MSCs的成骨細(xì)胞。綜上所述,PHBHHx、P3HB4HB和PHBVHHx支架具有很好的生物相容性,能夠促進(jìn)UC-MSCs的生長(zhǎng)和支持UC-MSCs向成骨細(xì)胞的分化,其中PHBVHHx支架促進(jìn)UC-MSCs生長(zhǎng)的能力最強(qiáng)。然而,從物理性能上來(lái)說(shuō),P3HB4HB材料的硬度最大,適用于骨和軟骨等組織的修復(fù),而PHBVHHx材料的硬度最小,適用于軟體組織的修復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329
【圖文】：

1. UC-MSCs 細(xì)胞圖片。A 圖為 100×的細(xì)胞圖片，B 圖為 200×細(xì)胞圖片，在 A 圖中能亮的圓點(diǎn)，就是剛分裂增殖的細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)很好；B 圖在 200×下看到一些細(xì)胞中間圓環(huán)，圓環(huán)中間即為細(xì)胞核。C-MSCs 成骨分化后的成骨細(xì)胞形態(tài)將 UC-MSCs 細(xì)胞進(jìn)行傳代到六孔板中，第二天給細(xì)胞換液，換成成骨分化培1 天的成骨分化培養(yǎng)。培養(yǎng)一個(gè)星期以后，細(xì)胞開始成團(tuán)生長(zhǎng)，部分細(xì)胞形成的三角形，特別是團(tuán)的中心，細(xì)胞密集，大部分細(xì)胞變成方形和三角形，很 2）。由于成骨分化需要 21 天，為了避免細(xì)胞長(zhǎng)的太滿死掉，在配置培養(yǎng)液的少 FBS 的用量，最少不能低于整個(gè)成骨分化培養(yǎng)液體積的 2%。

UC-MSCs 成骨分化 21 天（100×）。UC-MSCs 在 24 孔板中用成骨分化液培養(yǎng) 21狀變成橢圓狀，或者三角形。 制作出的支架按照實(shí)驗(yàn)方法中的支架制作技術(shù)，將 PHBHHx、P3HB4HB 和 PHBVH和 1’4-二氧六環(huán)混合液加入到磨具或者小燒杯中，小燒杯立即轉(zhuǎn)移到-8凍過(guò)夜的支架在凍干機(jī)中快速抽真空。30 分鐘后就能看到支架的輪廓。圓潤(rùn)、光滑，雖然比較光滑，不過(guò)如果從外面看，能發(fā)現(xiàn)支架的中間是觸摸整個(gè)支架，能夠分辨出幾種支架材料的硬度，P3HB4HB 硬度最大，HHx 的硬度稍微軟一點(diǎn)，不過(guò)韌性比較好，而 PHBVHHx 最軟。（圖 3）

UC-MSCs 成骨分化 21 天（100×）。UC-MSCs 在 24 孔板中用成骨分化液培養(yǎng) 21 天，一狀變成橢圓狀，或者三角形。 制作出的支架按照實(shí)驗(yàn)方法中的支架制作技術(shù)，將 PHBHHx、P3HB4HB 和 PHBVHHx 三種和 1’4-二氧六環(huán)混合液加入到磨具或者小燒杯中，小燒杯立即轉(zhuǎn)移到-80℃中急凍過(guò)夜的支架在凍干機(jī)中快速抽真空。30 分鐘后就能看到支架的輪廓。支架的圓潤(rùn)、光滑，雖然比較光滑，不過(guò)如果從外面看，能發(fā)現(xiàn)支架的中間是比較低觸摸整個(gè)支架，能夠分辨出幾種支架材料的硬度，P3HB4HB 硬度最大，但是HHx 的硬度稍微軟一點(diǎn)，不過(guò)韌性比較好，而 PHBVHHx 最軟。（圖 3）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張維成;;不同濃度地塞米松對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞成脂、成骨分化的影響[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年29期

2 葉成;史鵬;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與成骨[J];中國(guó)矯形外科雜志;2008年05期

3 徐若男;施明;王福生;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的特征及其臨床應(yīng)用前景[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2010年01期

本文編號(hào)：2803200