【摘要】：目的：研究硒與幽門螺桿菌的相互關系。方法：應用電子顯微鏡、生化反應實驗及細菌培養(yǎng)等方法，觀察了硒對幽門螺桿菌形態(tài)結構、酶活性、空泡毒素（VacA ）作用的影響；應用瓊脂糖凝膠電泳、DNA測序分析、免疫印跡分析及細胞培養(yǎng)等方法,檢測了硒對重組VacA的影響；通過動物實驗探討了硒對幽門螺桿菌感染的小鼠(BALB/C小鼠)胃黏膜細胞損傷的保護作用及對小鼠CD4、CD8活性的影響；應用免疫組化染色法檢測了126例經(jīng)胃鏡及病理學明確診斷的正常及不同胃粘膜病變組織標本的CD44V6、P16、C-met及PCNA的表達；應用快速脲酶試驗結合Warthin-Starry銀染色確定幽門螺桿菌感染；應用MK光纖壓力密閉微波溶解爐、RF-1501熒光分光光度計檢測了胃黏膜組織硒含量。體外實驗結果表明：一定濃度的硒作用HP后，HP菌落數(shù)量隨著硒濃度的增加而減少,菌落顏色由灰白色變?yōu)榇u紅色，溶血現(xiàn)象隨硒濃度的增加和作用時間的延長而逐漸消失，HP的形態(tài)由彎曲形變?yōu)榍蛐位驒E圓形，鞭毛及菌毛出現(xiàn)脫落現(xiàn)象；硒對尿素酶、過氧化氫酶、堿性磷酸酶活性無影響或影響不明顯；一定濃度的硒能使表達VacA的pET32a-vacA-E.coli BL21工程菌產(chǎn)生脂溶性磚紅色色素，顏色隨硒濃度增加而加深；一定濃度的硒通過抑制pET32a-vacA-E.coli BL21工程菌的生長，減少重組VacA表達量，但不影響其空泡毒活性及編碼基因序列；純化后的VacA重組蛋白可被VacA抗體識別，具有良好的抗原性。動物實驗結 WP=111 果表明：一定濃度的幽門螺桿菌可誘發(fā)小鼠胃粘膜組織炎癥和癌前病變，使小鼠血中CD4/CD8比例下調(diào)；一定濃度的硒對幽門螺桿菌感染所致的胃粘膜損傷有保護作用，增強CD4細胞活性，使CD4/CD8比例上調(diào)。臨床標本研究結果表明：在系列胃粘膜病變中，P16表達HP陽性標本顯著低于HP陰性標本（P0.01）；CD44V6、C-met、PCNA表達HP陽性標本均顯著高于陰性標本（P0.01）；在HP感染的胃粘膜病變組織中，P16表達與CD44V6、C-met、PCNA表達均呈負相關（rs=-0.6971,P0.01；rs=-0.4811, P0.01；rs=-0.6075,P0.01）；CD44V6表達與C-met、PCNA表達相互呈正相關（rs=0.6550,P0.01；rs=0.4977,P0.01）；HP感染的胃粘膜病變組織硒含量明顯升高，并隨胃粘膜病變程度加重相對降低，但高于正常組織；硒含量分別與CD44V6、C-met、PCNA表達陽性率呈負相關（P0.05），而與P16表達陽性率呈正相關（P0.05）。綜合以上實驗結果說明: 一定濃度的硒可使幽門螺桿菌的形態(tài)發(fā)生球形變，侵襲力減弱，致病性降低；一定濃度的硒可使表達重組VacA的大腸埃希菌產(chǎn)生脂溶性磚紅色色素，并隨硒濃度增加色素產(chǎn)生量增多；硒可減少幽門螺桿菌重組VacA的表達量，但不影響其細胞空泡毒活性及編碼基因序列；一定濃度的硒對幽門螺桿菌感染誘發(fā)的小鼠胃粘膜病變有保護作用，通過增強CD4細胞活性，提高機體細胞免疫和體液免疫，抑制由幽門螺桿菌感染所致的CD4/CD8比例下調(diào)；HP感染可促進胃粘膜病變組織CD44V6、C-met、PCNA編碼基因的表達，抑制P16編碼基因的表達；硒可直接或間接地抑制CD44V6、PCNA、C-met編碼基因的 WP=112 表達，促進P16編碼基因的表達，拮抗幽門螺桿菌對上述蛋白的調(diào)控作用；幽門螺桿菌感染的胃粘膜病變組織硒含量明顯升高，并隨胃粘膜病變程度加重相對降低，但高于正常組織。其原因可能是機體為保護性地對抗幽門螺桿菌感染所致增加的活性氧而動員硒，使組織硒含量增加，但由于隨胃黏膜組織病變程度加重，硒消耗增多，使含量又相對降低；硒含量分別與CD44V6、C-met、PCNA表達陽性率呈負相關，而與P16表達陽性率呈正相關。由此可見，一定濃度的硒可以防止HP對胃黏膜的損傷。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R378
【圖文】：

加硒（12mmol/L）培養(yǎng)的 HP圖 1-2 不同濃度硒作用 HP48h 的形態(tài)結構（電鏡照片） 硒對 HP 酶活性的影響硒對 HP 尿素酶有輕微的影響，而對過氧化氫酶、堿性磷酸酶無影硒對 HP 空泡毒素（VacA）作用的影響 硒對 VacA 細胞空泡毒作用的影響：.1 硒對 VacA 致 SGC-7901 細胞形態(tài)學變化的影響：硒-VacA(硒終濃度為 6μmol/l)、VacA(100μl)分別作用 SGC-79h 后，細胞開始出現(xiàn)小空泡，隨著培養(yǎng)時間的延長，空泡樣變 SGC-數(shù)目和空泡數(shù)目逐漸增多，并且空泡體積逐漸增大；24h 后作用，但多數(shù) SGC-7901 細胞仍貼壁生長；48h 后部分細胞開始出現(xiàn)、死亡，并漂浮于培養(yǎng)液中；72h 后多數(shù)細胞死亡。硒-VacA 與

圖 2-1 正常培養(yǎng) 48h 的 SGC-7901 細胞圖 2-2 Se-VacA 作用 48h 的 SGC-7901 細胞（空泡毒作用）.1.2 硒對 VacA 致 SGC-7901 細胞空泡變百分率的影響：從加入不同濃度硒培養(yǎng) 48h 的 HP 提取的 Vac（ASe+-VacA）對 SGC-79

44圖 2-2 Se-VacA 作用 48h 的 SGC-7901 細胞（空泡毒作用）.1.2 硒對 VacA 致 SGC-7901 細胞空泡變百分率的影響：從加入不同濃度硒培養(yǎng) 48h 的 HP 提取的 Vac（ASe+-VacA）對 SGC-79胞的空泡毒作用隨著硒濃度的增加而呈減弱趨勢，表 2-1。從無硒培8h 的 HP 提取的 VacA（Se--VacA）對 SGC-7901 細胞的空泡毒作用隨 Va的增加而增強，不受硒的影響，各組間比較 P 值>0.05,無統(tǒng)計學意義 2-2。上述結果說明硒通過抑制 HP 生長而使 VacA 量減少，而對 Va

【參考文獻】

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1 牟維鵬;硒蛋氨酸的營養(yǎng)、代謝和毒性[J];國外醫(yī)學.衛(wèi)生學分冊;2001年04期

2 莊小強,林三仁,鄭杰,孫桂華,田野;c-met基因表達與胃癌增殖在幽門螺桿菌感染中的關系[J];臨床內(nèi)科雜志;2002年02期

3 吳喬,汪德耀;亞硒酸鈉對人胃腺癌細胞中c-Ha-ras和-cerbB2癌基因及其蛋白的影響[J];廈門大學學報(自然科學版);1997年01期

4 洪素珍,孫昕;腫瘤患者及健康人血清硒水平研究[J];微量元素與健康研究;1996年03期

5 王正祥，陳紅菊，申厚鳳;幽門螺桿菌形成空泡細胞毒素的提純與特征分析[J];中國人獸共患病雜志;1996年04期

6 沈佳堯,侯鵬,祭美菊,郭慶明,何農(nóng)躍;半巢式甲基化特異性聚合酶鏈反應在胃癌p16基因甲基化檢測中的應用[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2004年02期

7 陳潔平,沈鼎明,楊致邦;cagA基因陽性幽門螺桿菌培養(yǎng)濾液對人胃粘膜上皮細胞系GES-1生長的影響[J];中華微生物學和免疫學雜志;2002年03期

本文編號：2798575