【摘要】： 為探討表面梯度化材料對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附與遷移行為的影響,我們通過(guò)不同方式體外構(gòu)建材料表面I型膠原蛋白梯度(蛋白密度梯度和圖案化不同曲率和弧度梯度的蛋白基底),來(lái)研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞在梯度表面的黏附狀態(tài)和運(yùn)動(dòng)趨化性。實(shí)驗(yàn)一通過(guò)連續(xù)堿水解聚乳酸膜制備形成羧基密度,并共價(jià)偶聯(lián)膠原蛋白形成相應(yīng)的蛋白密度梯度。接觸角測(cè)量?jī)x和激光掃描共聚焦顯微鏡分別表征了- COOH密度梯度和膠原蛋白密度梯度,通過(guò)熒光顯微鏡可觀測(cè)到明顯的膠原蛋白梯度,以上結(jié)果證實(shí)了聚乳酸薄膜上通過(guò)連續(xù)堿水解方法制備膠原蛋白梯度的可行性。在低密度和中間密度的膠原蛋白梯度區(qū)域培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的沿著梯度方向的運(yùn)動(dòng)性(凈遷移,趨化指數(shù),遷移率和細(xì)胞軌跡證實(shí)),然而,內(nèi)皮細(xì)胞在高濃度蛋白密度區(qū)域的運(yùn)動(dòng)與膠原蛋白梯度反向。結(jié)果表明,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)受膠原蛋白梯度趨向,但必須是適宜的利于細(xì)胞黏附的蛋白密度。實(shí)驗(yàn)二基于仿生學(xué)原理,根據(jù)人體內(nèi)不同種類(lèi)和不同口徑(從最細(xì)小的毛細(xì)血管到大動(dòng)脈)的血管厚度和彎曲度不同設(shè)計(jì)出一系列弧度梯度(20μm,60μm,100μm弧度寬度),并運(yùn)用微接觸印刷技術(shù)制備出不同曲率半徑的膠原蛋白基底,掃描電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡檢驗(yàn)PDMS印章表面平整度,激光共聚焦顯微鏡檢驗(yàn)基底蛋白黏附情況和均勻度,細(xì)胞骨架蛋白肌動(dòng)蛋白和粘著斑蛋白染色觀測(cè)細(xì)胞粘附狀態(tài),活細(xì)胞工作站對(duì)細(xì)胞6h運(yùn)動(dòng)情況進(jìn)行錄像,運(yùn)用相關(guān)軟件測(cè)定20,60,100μm弧度寬度梯度之間或自身不同曲率半徑之間的細(xì)胞遷移速度和細(xì)胞遷移總位移與凈位移比值。結(jié)果表明細(xì)胞的黏附狀態(tài)與弧度寬度成正比;設(shè)計(jì)的曲率半徑越小,遷移速度越快,運(yùn)動(dòng)性越強(qiáng);在不同弧度寬度的材料表面細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力如下:100μm20μm60μm。本研究分析了內(nèi)皮細(xì)胞在不同形式的膠原蛋白梯度上的一系列運(yùn)動(dòng)遷移參數(shù),獲得了內(nèi)皮細(xì)胞黏附、運(yùn)動(dòng)遷移的最適宜的蛋白梯度基底,為進(jìn)一步研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞化學(xué)誘導(dǎo)運(yùn)動(dòng)性提供依據(jù),為植入體在植入宿主后的微循環(huán)血管新生中的脈管重塑和血管再生提供新的思路,為組織工程血管支架材料的內(nèi)皮化提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【圖文】：

的細(xì)胞骨架蛋白，其主要是在細(xì)胞連接中將肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，在細(xì)胞連接和與基底黏附中有重發(fā)生適當(dāng)?shù)酿じ讲拍苓M(jìn)行增殖、遷移和運(yùn)動(dòng)，若多，粘著斑穩(wěn)定且增多，細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性則減弱；骨架連接的機(jī)械強(qiáng)度，粘著斑減少，細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)括 6 個(gè)步驟如圖[42]：①細(xì)胞感受外來(lái)信號(hào)。②細(xì)胞周?chē)a(chǎn)生大量黏著斑[44-47]；④細(xì)胞骨架收后在前進(jìn)方向形成新的黏著點(diǎn)[48-49]。⑤后部應(yīng)力許多病變或腫瘤組織中，受腫瘤內(nèi)炎性因子趨化入到腫瘤實(shí)體內(nèi)形成新生的血管[50-52]，在這一度材料，通過(guò)觀察細(xì)胞骨架蛋白和粘著斑蛋白判效控制細(xì)胞在病變過(guò)程中的運(yùn)動(dòng)遷移，就能夠控，達(dá)到預(yù)防和治療病變組織的效果。

多次測(cè)量得到平均值，使液滴流速達(dá)到 1證液面完全覆蓋聚乳酸膜(55 mm×25 mm)，后續(xù)實(shí)大小與玻片大小一致(55 mm×25 mm)，特定夾子固 的 NaOH 溶液置于訂制的接觸角測(cè)量?jī)x分液瓶符合，將包被聚乳酸膜的玻片豎立放入特定容器中，打反應(yīng)容器中，開(kāi)始計(jì)時(shí)。同時(shí)間制備均一羧基密度浸泡在 1 mol/L 的 NaOH 溶液中。同時(shí)將未經(jīng)過(guò)堿浸泡在堿液中的載玻片，用大量 0.1 mol/L 的 HCl 解時(shí)，產(chǎn)生游離羧基，用 HCl 沖洗水解后的材料，可風(fēng)干，置于熱風(fēng)干燥箱中 37℃干燥至材料表面無(wú)可于后期實(shí)驗(yàn)（為方便計(jì)算，將聚乳酸膜按照羧基濃 0-55 mm）。

[75]。本實(shí)驗(yàn)硅片模板由德國(guó)光學(xué)科技研究所利用軟刻蝕技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)圖形尺寸如圖2.7中所示，根據(jù)設(shè)計(jì)圖案利用光刻技術(shù)制備硅片模板。圖2.7模板設(shè)計(jì)圖，弧度寬度分別為①20μm②60μm③100μmFig.2.7 Scheme of the masker, the width of the radian is ①20μm②60μm③100μm②.PDMS印章的制備1）聚二甲基硅氧烷Sylgard184與交聯(lián)劑按10:1的比例混合，充分?jǐn)嚢杌旌虾�，放入真空干燥箱中抽真�?0min，除去混合物中氣泡。2）將真空處理后的混合液均勻涂覆于模板表面，再將模板抽真空30 min。取出后放入70℃恒溫箱中交聯(lián)12 h，然后將PDMS印章和模板剝離，清洗印章表面?zhèn)溆谩DMS印章制備流程圖如圖2.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 潘力佳,何平笙;軟刻蝕——圖形轉(zhuǎn)移和微制造新工藝[J];微細(xì)加工技術(shù);2000年02期

2 林少芬,唐仕波,胡潔,鄭健j,鄭湖鈴,羅燕;人血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)及鑒定[J];眼科學(xué)報(bào);2000年02期

本文編號(hào)：2797699