【摘要】：目的：探索裸露的Caspase-3小干擾RNA在豬自體腎移植模型中對供腎的保護作用及機制。 方法：建立豬自體腎移植模型,切取左側(cè)腎臟4℃冷保存24h作為供腎,次日切除右腎后原位移植。(1)首先僅供腎局部給予0.3mg短效的裸露Ambion Silencer Select Caspase-3siRNA (n=6),通過組織病理學(xué)、腎功能、Caspase-3mRNA和蛋白表達、凋亡和炎癥細胞數(shù)量評價短效siRNA在冷保存后及移植后2d對供腎的保護效應(yīng),同時應(yīng)用熒光標(biāo)記的siRNA追蹤其在體內(nèi)的代謝與分布。(2)隨后使用長效的血清穩(wěn)定型Caspase-3siRNA,供腎局部給予0.3mg,在移植前全身給予0.9mg,同時使用等量Negative siRNA做陰性對照(n=5),在冷保存后及移植后2周評價其對供腎的保護作用及siRNA潛在的毒性。檢測指標(biāo)包括組織及外周血白細胞Caspase-3mRNA表達、組織Caspase-3蛋白表達、凋亡和炎癥細胞數(shù)量、炎癥因子和轉(zhuǎn)錄因子mRNA水平、HMGB1、TLR3、TLR7蛋白表達、組織病理學(xué)及腎功能。 結(jié)果：(1) Caspase-3siRNA在冷保存后被腎臟細胞所攝取,但在移植后2d腎臟內(nèi)表達降低。在短效Caspase-3siRNA治療組的冷保存供腎中,Caspase-3mRNA和32kD前體蛋白表達顯著下降,但是在移植后2d腎臟中,Caspase-3mRNA和17kD激活亞單位蛋白表達顯著上升,并且活性Caspase-3+細胞、凋亡細胞及MPO+細胞均明顯增加,組織損傷加重,腎功能無明顯變化。(2)使用長效的血清穩(wěn)定型Caspase-3siRNA治療后,無論是在冷保存后還是移植后2周的腎臟,Caspase-3mRNA和蛋白表達、凋亡和MPO+細胞數(shù)量、IL-1β、IL-6、NF-κB、IFN-α、 IFN-β、IFN-γ mRNA表達及HMGB1蛋白表達均顯著降低,TLR3和TLR7蛋白表達無明顯變化,組織損傷減輕,腎功能明顯改善。 結(jié)論：(1)短效的裸露Caspase-3siRNA供腎內(nèi)局部給藥可有效減輕24h冷保存后的細胞凋亡,但不能保護術(shù)后2d的移植腎,可能由于短效siRNA的不穩(wěn)定及局部治療的不足所引起；(2)長效的血清穩(wěn)定型裸露Caspase-3siRNA供腎內(nèi)局部給藥及移植前全身給藥不僅能保護冷保存后的供腎,還能有效保護術(shù)后2周的移植腎；(3)新型的血清穩(wěn)定型Caspase-3siRNA并不引起TLR依賴的固有免疫反應(yīng),無明顯副作用。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R699.2;R-332
【圖文】：

源 www.ClinicalTfial^s.org 圖 1 )。~ .j y

本文編號：2788455