發(fā)布時(shí)間：2020-08-10 18:31

【摘要】：目的：探索裸露的Caspase-3小干擾RNA在豬自體腎移植模型中對(duì)供腎的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：建立豬自體腎移植模型,切取左側(cè)腎臟4℃冷保存24h作為供腎,次日切除右腎后原位移植。(1)首先僅供腎局部給予0.3mg短效的裸露Ambion Silencer Select Caspase-3siRNA (n=6),通過(guò)組織病理學(xué)、腎功能、Caspase-3mRNA和蛋白表達(dá)、凋亡和炎癥細(xì)胞數(shù)量評(píng)價(jià)短效siRNA在冷保存后及移植后2d對(duì)供腎的保護(hù)效應(yīng),同時(shí)應(yīng)用熒光標(biāo)記的siRNA追蹤其在體內(nèi)的代謝與分布。(2)隨后使用長(zhǎng)效的血清穩(wěn)定型Caspase-3siRNA,供腎局部給予0.3mg,在移植前全身給予0.9mg,同時(shí)使用等量Negative siRNA做陰性對(duì)照(n=5),在冷保存后及移植后2周評(píng)價(jià)其對(duì)供腎的保護(hù)作用及siRNA潛在的毒性。檢測(cè)指標(biāo)包括組織及外周血白細(xì)胞Caspase-3mRNA表達(dá)、組織Caspase-3蛋白表達(dá)、凋亡和炎癥細(xì)胞數(shù)量、炎癥因子和轉(zhuǎn)錄因子mRNA水平、HMGB1、TLR3、TLR7蛋白表達(dá)、組織病理學(xué)及腎功能。 結(jié)果：(1) Caspase-3siRNA在冷保存后被腎臟細(xì)胞所攝取,但在移植后2d腎臟內(nèi)表達(dá)降低。在短效Caspase-3siRNA治療組的冷保存供腎中,Caspase-3mRNA和32kD前體蛋白表達(dá)顯著下降,但是在移植后2d腎臟中,Caspase-3mRNA和17kD激活亞單位蛋白表達(dá)顯著上升,并且活性Caspase-3+細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及MPO+細(xì)胞均明顯增加,組織損傷加重,腎功能無(wú)明顯變化。(2)使用長(zhǎng)效的血清穩(wěn)定型Caspase-3siRNA治療后,無(wú)論是在冷保存后還是移植后2周的腎臟,Caspase-3mRNA和蛋白表達(dá)、凋亡和MPO+細(xì)胞數(shù)量、IL-1β、IL-6、NF-κB、IFN-α、 IFN-β、IFN-γ mRNA表達(dá)及HMGB1蛋白表達(dá)均顯著降低,TLR3和TLR7蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化,組織損傷減輕,腎功能明顯改善。 結(jié)論：(1)短效的裸露Caspase-3siRNA供腎內(nèi)局部給藥可有效減輕24h冷保存后的細(xì)胞凋亡,但不能保護(hù)術(shù)后2d的移植腎,可能由于短效siRNA的不穩(wěn)定及局部治療的不足所引起；(2)長(zhǎng)效的血清穩(wěn)定型裸露Caspase-3siRNA供腎內(nèi)局部給藥及移植前全身給藥不僅能保護(hù)冷保存后的供腎,還能有效保護(hù)術(shù)后2周的移植腎；(3)新型的血清穩(wěn)定型Caspase-3siRNA并不引起TLR依賴的固有免疫反應(yīng),無(wú)明顯副作用。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R699.2;R-332
【圖文】：

源 www.ClinicalTfial^s.org 圖 1 )。~ .j y

本文編號(hào)：2788455