發(fā)布時間：2020-08-08 17:19

【摘要】： 普通棉耳狨猴與人類的親緣關(guān)系相近，加上體小、易飼養(yǎng)、好管理等優(yōu)點，已廣泛用于醫(yī)學領(lǐng)域的研究。1987年天津醫(yī)科大學從國外引進普通棉耳狨猴，用于地方病的基礎(chǔ)研究，取得了滿意的成果。經(jīng)過努力已成功地繁育了第一代和第二代，使年擁有量在100只以上，成為國內(nèi)目前唯一較為龐大的群體，并已向國家八五、九五攻關(guān)課題提供動物，產(chǎn)生了較大的社會效益和經(jīng)濟效益。 1999年6月，該動物中心飼養(yǎng)的普通棉耳狨猴群體中暴發(fā)急性呼吸道傳染病，發(fā)病率幾乎100％，死亡率達33％。本次發(fā)病具有明顯的呼吸道病毒感染特征：突然暴發(fā)，迅速蔓延，發(fā)病率高并伴有一定的死亡率。為發(fā)展和保護我國唯一的狨猴種群基地，并了解病原體與人類的關(guān)系，我們對狨猴死亡的病因進行了深入研究。 第一部分研究主要是進行病毒分離及病原學鑒定。 在排除細菌感染的基礎(chǔ)上，通過死亡狨猴肺組織勻漿接種雞胚和MDCK細胞的分離培養(yǎng)，分離出一株具有很高血凝效價的病毒株。通過雙份血清試驗及動物接種試驗，發(fā)現(xiàn)：(1)發(fā)病狨猴恢復期血清對分離病毒抗體效價有4倍以上升高；(2)分離病毒接種狨猴，狨猴出現(xiàn)呼吸道癥狀，4周后血清抗體與接種前相比有60倍以上升高；(3)分離病毒接種SPF小鼠，從死亡小鼠肺組織可分離出與接種病毒一致的病毒。確認該病毒是本次疾病流行的病原體。 我們在初步分析本次疾病流行規(guī)律的同時，發(fā)現(xiàn)動物中心工作人員都有此病原體的抗體，并且在正常人群(獻血員)中也有此病毒的抗體，陽性率高達 46．7％門 人提示此病原體與人類有密切的關(guān)系，可能是一株人和誡猴共患 的呼吸道病毒。 第二部分研究的目的是對分離到的病原體進行進一步鑒定。 采用6種能夠獲得的呼吸道病毒標準血清及標準毒株（甲型流感HINI、 H3NZ；乙型流感BIBeijingl243197、BIBJll84193！the；新城疫病毒；仙臺病毒） 用交叉血凝抑制試驗對分離毒株進行鑒定，發(fā)現(xiàn)該毒株與仙臺病毒血清學特征 最為接近，但與乙型流感病毒等也有交叉反應(yīng)。 將病毒液濃縮后用磷鎢酸負染，電鏡觀察進行形態(tài)學鑒定，分離毒株核衣 殼結(jié)構(gòu)明顯，具有典型的副粘病毒特征。 采用分子生物學方法，設(shè)計出 Inf A、Inf B、hPIV、仙臺病毒、hPIVZ、 SVS、hPIV3和hPIV4等8對可能病毒的特異性PCR引物，用RTPCR技術(shù)檢 測病毒基因組，發(fā)現(xiàn)只有仙臺病毒的引物能夠擴增出相應(yīng)分子量大小的產(chǎn)物。 擴增產(chǎn)物經(jīng)過序列測定后，用生物信息學方法與各基因庫中核酸序列進行比較， 確認該分離毒株是副流感1型病毒中的仙臺病毒。 第三部分主要是進行分離病毒與人群關(guān)系的研究，克隆病毒的HN基因并 將其與人副流感1型病毒進行比較，為開發(fā)一種可用于人類也可用于誡猴疾病 預防的疫苗提供理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。 我們檢驗了天津市53份 14周歲以下）L童血清、36份 15～50歲青、中年 人血清、43份 50歲以上中、老年人血清和山西省 18份血清，抗體陽性率分別 為45．28％、41．67％、60．47％和50％。經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，不同年齡、省份的人群 血清中對應(yīng)于仙臺病毒Tiwiin株的抗體存在情況無差別，總體的抗體陽性率為 49．3 3％。提示該病毒與人關(guān)系密切。 仙臺病毒的HN蛋白是其主要的抗原物質(zhì)，有可能作為基因疫苗的成分之 一。為此，我們設(shè)計了擴增仙臺病毒HN基因全部序列的PCR引物，用高保真 耐熱 DNA聚合酶擴增出特異性 PCR產(chǎn)物，然后用普通 Tq酶為產(chǎn)物加上突出 4 的3人堿基，再用A／T連接的方式克隆到質(zhì)粒載體上，并對其進行了序列測定。 根據(jù)測定的核酸序列推測出它的蛋白質(zhì)序列，然后與人副流感1 型病毒 humMashingtonll957毒株的HN蛋白進行了同源性分析。發(fā)現(xiàn)它們整體同源 性為 71％，包膜外區(qū)同源性高達 76％。提示我們所克隆的 HN基因有望作為一 種疫苗成分同時增強人體和誡猴對這兩種副流感1型病毒——仙臺病毒和人副 流感1型病毒的抵抗力。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R-332

【引證文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前2條

1 元清華;板藍根醇提液體外抑制單純皰疹病毒-1和仙臺病毒的研究[D];延邊大學;2003年

2 李昕;仙臺病毒HN基因核酸疫苗免疫幼鼠的效果評價[D];天津醫(yī)科大學;2006年

本文編號：2785866