【摘要】：目的：建立睪丸支持細(xì)胞體外缺氧模型，研究缺氧對(duì)于雄性生殖系統(tǒng)中支持細(xì)胞的活性和功能的影響，在此基礎(chǔ)之上進(jìn)一步探討產(chǎn)生活性和功能影響的可能機(jī)制，并尋找能夠減緩缺氧損傷的保護(hù)劑。 方法：在睪丸支持細(xì)胞體外缺氧模型的基礎(chǔ)之上，利用CoCl2作為體外缺氧模型的模擬劑。模擬支持細(xì)胞的缺氧環(huán)境，采用MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)缺氧狀態(tài)下支持細(xì)胞的活性和凋亡率。并利用CoCl2模擬不同濃度下的支持細(xì)胞活性變化，檢測(cè)細(xì)胞活性是否存在劑量依賴性和時(shí)間依賴性。利用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)支持細(xì)胞凋亡情況，Western blot檢測(cè)凋亡效應(yīng)分子caspase-3的變化。Real-time PCR檢測(cè)支持細(xì)胞的分泌功能。 結(jié)果：成功建立體外缺氧模型，支持細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞發(fā)生皺縮，體積縮小。發(fā)現(xiàn)CoCl2誘導(dǎo)缺氧能降低支持細(xì)胞活性存在濃度依賴性，但是不具備時(shí)間依賴性。同樣對(duì)于支持細(xì)胞凋亡也存在濃度依賴性，而且也具備時(shí)間依賴性。CoCl2誘導(dǎo)缺氧能夠通過氧化應(yīng)激引起依賴線粒體的凋亡途徑激活導(dǎo)致支持細(xì)胞凋亡。并且能夠激活促絲裂原活化蛋白激酶途徑：缺氧能夠誘導(dǎo)原代支持細(xì)胞凋亡，通過氧化應(yīng)激形式，在促絲裂原蛋白激酶途徑的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用下激活依賴線粒體的內(nèi)源性凋亡途徑。缺氧還能夠引起支持細(xì)胞功能發(fā)生改變，可能繼而影響生精功能。 結(jié)論：成功建立支持細(xì)胞體外缺氧模型，發(fā)現(xiàn)支持細(xì)胞在缺氧誘導(dǎo)劑作用下存在細(xì)胞活性和凋亡率的劑量依賴性改變。而MAPK信號(hào)通路參與了凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。凋亡由氧化應(yīng)激激活的內(nèi)源性凋亡途徑完成。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2782392