【摘要】：由外源性刺激誘發(fā)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移,是誘發(fā)動脈粥樣硬化和血管再狹窄的重要原因。近期的研究表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress, ERS)與多種外源性刺激導(dǎo)致的血管平滑肌細(xì)胞的病理、生理活動密切相關(guān)。近年來針對動脈粥樣硬化疾病發(fā)展過程中ERS的研究方興未艾,但研究對象主要集中在損傷的內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中,而對于血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)中ERS的作用及機(jī)制研究相對較少。本課題關(guān)注于ERS在VSMCs中可能產(chǎn)生的作用及作用機(jī)制,為動脈粥樣硬化疾病的預(yù)防和治療提供參考。 衣霉素(tunicamycin, Tm)作用于VSMCs后可產(chǎn)生明顯ERS。現(xiàn)象包括：產(chǎn)生明顯的XBP1的mRNA剪切,并且使ATF6、Bip和CHOP的mRNA表達(dá)量以及XBPls、Grp94和Bip蛋白的表達(dá)量呈劑量依賴性上升。然而通過CCK-8及MTT實(shí)驗(yàn)證明Tm對于VSMCs的細(xì)胞活力影響有限。Annexin-V-FITC/PI雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Tm僅誘導(dǎo)產(chǎn)生輕微的細(xì)胞凋亡。 本研究中我們通過溴脫氧尿苷(BrdU)摻入法和形態(tài)學(xué)觀察的方法首次發(fā)現(xiàn)預(yù)孵Tm能夠顯著地劑量依賴性地抑制由血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)誘導(dǎo)的VSMCs的增殖。同時(shí)我們也首次通過劃痕實(shí)驗(yàn)和遷移小室(Transwell)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Tm具有明顯抑制PDGF刺激的VSMCs遷移運(yùn)動的效果,并且具有劑量依賴性。在分子水平上我們檢測了增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表達(dá)水平以及MMP-2的活性,證實(shí)Tm能夠降低PDGF刺激的VSMCs中PCNA和MMP-2蛋白的活性。 經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Tm作用于PDGF刺激的VSMCs可以引起細(xì)胞中血紅素加氧酶1(heme oxygenase-1, HO-1)的mRNA和蛋白表達(dá)量的升高,并降低ERK1/2的磷酸化水平和活性。Tm的負(fù)調(diào)控作用與cyclin E-CDK2和cyclin D1-CDK4蛋白活性降低和p27的活性升高有關(guān)。更重要的是,HO-1的siRNA可以部分抵消Tm抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移的作用。上述結(jié)果說明Tm對VSMCs增殖和遷移的影響是通過誘導(dǎo)HO-1表達(dá)、抑制ERK1/2信號通路的活化、阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程使之停留在G1/S期等機(jī)制共同作用產(chǎn)生的。另外,Tm可以降低PDGF作用產(chǎn)生的MCP-1、 PAI-1和OPN等部分炎癥因子的基因表達(dá)水平。 綜上所述,本研究證明了預(yù)孵ERS的誘導(dǎo)物Tm可以防止由PDGF刺激產(chǎn)生的VSMCs的異常增殖和遷移運(yùn)動。在此過程中,HO-1蛋白及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白共同發(fā)揮調(diào)控作用。因此我們認(rèn)為,適當(dāng)濃度的Tm對于動脈粥樣硬化中VSMCs增殖和向內(nèi)膜遷移的運(yùn)動可能具有良好抑制效果,并對動脈粥樣硬化等心腦血管疾病具有潛在的預(yù)防和治療作用。
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2767242