【摘要】： 前言 1955年Melrose應(yīng)用心臟停搏液進行心肌保護，發(fā)展至今，心肌保護領(lǐng)域理論已在臨床整體水平、亞細(xì)胞水平及分子水平獲得全方位的突破。體外循環(huán)心內(nèi)直視手術(shù)的心肌保護是多方面的，簡單概括為”慎于術(shù)前，嚴(yán)于術(shù)中，善于術(shù)后”。術(shù)前心肌保護工作主要為改善心功能，增加心肌能量貯備；術(shù)中主要是降低心肌氧耗，減輕或預(yù)防心肌缺血再灌注損傷；術(shù)后保證冠狀動脈血供，控制心臟前后負(fù)荷，促進心肌順應(yīng)性的恢復(fù)。這其中關(guān)鍵是升主動脈阻斷后的心肌保護，而心肌保護液成分改進則是臨床心肌保護研究的重要內(nèi)容。研究發(fā)現(xiàn)，阻斷循環(huán)時心肌即使得到了保護，但恢復(fù)灌注時，再灌注卻會反常地造成損傷的加重。表現(xiàn)為心肌水腫，氧和基質(zhì)利用能力下降，高能磷酸鹽和糖原減少或耗盡，細(xì)胞內(nèi)大量鈣鹽沉積，線粒體嚴(yán)重受損，以及心肌細(xì)胞收縮功能減弱和心室順應(yīng)性改變。因為此現(xiàn)象出現(xiàn)在恢復(fù)血液循環(huán)后數(shù)分鐘，故稱為心肌缺血再灌注損傷(MIRI)。 現(xiàn)已證明，中性粒細(xì)胞和氧自由基是造成MIRI的重要因素。冠狀血管內(nèi)皮損傷是心肌缺血再灌注損傷發(fā)生、發(fā)展中的一個重要環(huán)節(jié)，同時，其本身是缺血再灌注后氧自由基的初始來源之一。中性粒細(xì)胞被氧自由基、細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)激活，粘附于血管內(nèi)皮表面，進而大量產(chǎn)生氧自由基，攻擊心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，同時形成微栓，阻塞微循環(huán)，導(dǎo)致恢復(fù)血液灌注的心肌再度缺血、損傷、壞死。因此心肌保護的概念已從單純保護心肌延伸到緊密相關(guān)的血管內(nèi)皮功能的保護。同時，隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，人們逐步發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注損傷病理變化的核心是基因表達(dá)及其調(diào)控問題。參與這些基因調(diào)節(jié)的重要成份是由核因子-κB(NF-κB)和κB抑制性蛋白(I-κB)組成的復(fù)合物。NF-κB調(diào)節(jié)多種即早基因表達(dá)，參與免疫、炎癥和細(xì)胞防御等反應(yīng)。但不適當(dāng)?shù)募せ钣挚梢疬^度炎癥反應(yīng)和損傷，所以，調(diào)節(jié)NF-κB活性無疑將會有助于防治心肌缺血再灌注損傷。 1987年P(guān)almer等首次證明了內(nèi)皮衍生性血管舒張因子的主要活性成 分是一氧化氮(NO)。在心血管系統(tǒng)，NO被認(rèn)為具有擴張血管、抑制血小 板與中性粒細(xì)胞粘附、聚集、激活的功能。正是在這一背景下，當(dāng)前為防治 圍術(shù)期MIRI損傷，進行心肌保護的策略已經(jīng)集中到左旋精氨酸一氧化氮 (L一A嗯一NO)的合成通路上。四氫生物蝶嶺(BH4)是一氧化氮合酶(NOs) 的重要輔助因子，因而，內(nèi)源性NO的生成量嚴(yán)格依賴適當(dāng)?shù)腂H4水平。 BH4水平的減少可導(dǎo)致NOS功能失調(diào)，產(chǎn)生過量的氧自由基而代替NO的 產(chǎn)生。心肌的缺血再灌注損傷可引起內(nèi)源性BH4量減少，導(dǎo)致內(nèi)皮和心肌 細(xì)胞功能降低。 本實驗旨在:(l)通過建立成年和幼年大鼠離體全心缺血再灌注動物 模型，測定外源性補充BH4對心肌缺血再灌注過程中不同時點的NOS活 性、NO產(chǎn)量、脂質(zhì)過氧化物及心肌細(xì)胞ATP酶的影響以及缺血再灌注后冠 狀動脈流量恢復(fù)和心肌酶學(xué)的影響，判定BH4在成熟和未成熟心肌缺血再 灌注損傷中的作用。(2)檢測BH4對全心缺血再灌注動物模型中TNF-a 基因表達(dá)，心肌組織內(nèi)核因子一KB活性變化與細(xì)胞間粘附分子一1含量的 影響。初步探討B(tài)H4對心肌缺血再灌注損傷保護作用的機制，為心臟手術(shù) 心肌保護策略提供新的細(xì)胞靶點。 材料和方法 1.實驗動物:雄性成熟Wistar大鼠，體重220一3009，so只;健康Wistar 幼鼠，3一4周，雌雄不拘，體重50一709，so只。將成鼠和幼鼠分別隨機分 為實驗組和對照組，每組40只。 2.主要儀器:Keeler 2 .5倍顯微外科手術(shù)放大鏡，英國K吮ler公司; SSW一型顯微外科手術(shù)器械，上海手術(shù)器械廠;自制腸邢endo進離體心臟 灌注裝置;UP 200H型超聲勻漿機，德國;500一P紫外光可見光連續(xù)分光光 度計，法國; FORMA一25型深低溫冷凍冰箱，美國;TECAN sUNR巧E型酶標(biāo) 儀，奧地利;BCoo光學(xué)顯微鏡，臺灣;SHANDON Tbenno型全自動切片機，英 國;PTC一looPCR擴增儀，美國;Kodakm型凝膠成像系統(tǒng)分析儀，美國; ERMLE乃83K低溫高速離心機，德國。 3.主要實驗試劑:四氫生物蝶嶺，美國sigma公司;N。試劑盒、Nos測 定試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、肌酸激酶(CK)試荊盒、考馬斯亮蘭 蛋白測定試劑盒、MDA測定試劑盒、soD測定試劑盒、ATP酶測試盒，均購 自南京建成生物工程研究所;NF一KB巧5原位雜交檢測試劑盒和NF一KB巧5 免疫組化檢測試劑盒，武漢博士德生物工程有限公司;TNF一a PCR檢測試 劑盒，大連TaKaRa寶生物工程有限公司;TNF一a PcR引物，北京華美生物 工程公司;大鼠sICAM一l定量ELIsA試劑盒，上海森雄科技實業(yè)有限公司。 4.離體心臟灌注模型的制備:實驗動物腹腔注射10%烏拉坦(10xnl/ kg)麻醉，腹腔注射肝素鈉抗凝:成鼠sooU，幼鼠looU。開胸迅速取出心 臟，并立即浸人4℃冷生理鹽水中，經(jīng)主動脈插管后，連接于Ungendo進灌 注裝置上，以37℃K一H液逆行灌注，灌注壓恒定為70~Hg。經(jīng)巧而n的自 然灌流平衡后，實驗組及對照組分別用4℃含BH4 st.Tho~11，心臟停搏液 (20卿oFL)及st.Th。~n心臟停搏液進行停搏。心臟缺血30而n后，以 37℃K一H液再灌注120而n。分別留取缺血前、缺血
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R363
【圖文】：

表2結(jié)果顯示:缺血前二組心肌細(xì)胞中均無NF一KB巧5mRNA表達(dá)，心肌缺血再灌注中，對照組心肌細(xì)胞中的NF一KB巧5mRNA表達(dá)明顯，胞漿染色呈強陽性或極強陽性(圖1一5)。而實驗組缺血再灌注中，心肌細(xì)胞NF-KB巧5mRNA陽性程度明顯弱于對照組中同一時間點。

實驗組再灌注120而n原位雜交x4的，較少量NF.KBmRNA陽性細(xì)胞(_土)

對照組再灌注120而n原位雜交x4加，少量NF一山mRNA陽性細(xì)胞(+)

【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 吳磊;李曉強;曹鳳宏;李治國;;四氫生物蝶呤代謝紊亂導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙分子機制的研究進展[J];河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年02期

本文編號：2765047