【摘要】：【目的】 探討人中性粒細(xì)胞防御素以及細(xì)胞外核苷酸誘導(dǎo)呼吸道上皮細(xì)胞IL-8表達(dá)及其機(jī)制;克隆人中性粒細(xì)胞防御素基因cDNA,研究其cDNA在氣管上皮細(xì)胞的表達(dá),以期為呼吸道感染與炎癥性疾病天然免疫發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)及其防治打下基礎(chǔ)。 【方法】 Biogel P-10分子篩層析分離中性粒細(xì)胞防御素,質(zhì)譜分析、毛細(xì)管電泳鑒定其純度和分子量,瓊脂糖彌散法檢測(cè)其抗菌活性。乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)分析試劑對(duì)A549細(xì)胞毒作用。LiquiChip分析儀測(cè)定10種炎癥反應(yīng)相關(guān)細(xì)胞因子的水平。ELISA法測(cè)定A549刺激實(shí)驗(yàn)和刺激抑制實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8濃度。RT-PCR方法檢測(cè)A549細(xì)胞P2Y受體mRNA表達(dá)。反義寡核苷酸技術(shù)進(jìn)行P2Y受體阻斷實(shí)驗(yàn),生物發(fā)光法分析培養(yǎng)上清ATP含量。同位素~(125)I和熒光素FITC標(biāo)記,進(jìn)行中性粒細(xì)胞防御素與A549細(xì)胞的結(jié)合實(shí)驗(yàn)分析。增強(qiáng)型綠色熒光蛋白IL-8報(bào)告基因檢測(cè)ATP刺激后A549細(xì)胞報(bào)告基因表達(dá)。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染重組表達(dá)質(zhì)粒pBabe-Neo- HNP1于培養(yǎng)的人氣管上皮細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞HNP1mRNA表達(dá)。免疫組化法檢測(cè)轉(zhuǎn)染氣管上
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【圖文】：

瓊脂糖彌散法對(duì)純化的中性粒細(xì)胞防御素進(jìn)行抑菌功能實(shí)驗(yàn)，可見(jiàn)分離純化的防御素對(duì)大腸桿菌ATCC25922株有抑菌作用，并呈現(xiàn)劑量依賴(lài)關(guān)系(圖4)。中性粒細(xì)胞防御素含量(林g)圖4瓊脂糖彌散法鑒定人中性粒細(xì)胞防御素抑菌功能Fig.4Agardi飾sionass即nidicatnignatibaeterialaetiviytofhmunaneurtoPhildeefnsnisAl一BZ，加入防御素量為0D4、0.08、0.17、031、0.63、125、2.50林g

掀は赴銀烊幻庖叩牡鶻謐饔玫諞徊糠婔ZYZPZY4PZY6GAPDH圖101.A549細(xì)胞PZY受體mRNA表達(dá)的R-TPCR檢測(cè)Fig.10R-TPCRdeteetionofP2YereePtorsmRNAePxressioninA549eelIsA:25eyeles:B:30eycles;C:35eyelesa.DNAladderb.Control;e.Defensinsd.Defensins+Suramin:e.Defensins+Reaetivebluef.Control;9.Defensinsh.Defensins+Suramin;1.Defensins+Reaetivebluej.Control;k.Defensinsl，Defensins+Suramin;m.Defensins+Reaetivebluen.Control;0.DefensinsP.Defensins+Suramin:q.Defensins+Reaetiveblue國(guó)對(duì)照圈防御素圈防御素+蘇拉明么防御素+反應(yīng)藍(lán)圖lonPZY受體R-TPCR產(chǎn)物灰度掃描Fig.1011DnesiotmertienaaylsisofR-TPCRProudctsofPZYerc

RTC標(biāo)記防御素與A549細(xì)胞結(jié)合Fig.12BFITC一deefnsnisbnidnigtoA549eells

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本文編號(hào)：2763168