【摘要】： 目的:(1)分離、培養(yǎng)及鑒定兔脂肪源性干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)(2)探討及評(píng)估ADSCs的體外成骨特性。 方法:(1)取3月齡新西蘭白兔頸后部皮下脂肪組織,Ⅰ型膠原酶消化獲得細(xì)胞。繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,采用免疫細(xì)胞熒光法檢測(cè)細(xì)胞表面抗原CD44、CD45;分別加入成骨、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液對(duì)所獲得細(xì)胞進(jìn)行成骨成脂誘導(dǎo),并分別進(jìn)行形態(tài)學(xué)、堿性磷酸酶、鈣鹽沉積和油紅O染色相關(guān)檢測(cè);(2)將所獲得ADSCs分為成骨誘導(dǎo)組和非成骨誘導(dǎo)組,分別于誘導(dǎo)后1W、2W、3W、4W檢測(cè)兩組的堿性磷酸酶濃度和鈣離子濃度并作統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:(1)所獲細(xì)胞CD44陽(yáng)性表達(dá),CD45陰性表達(dá);所繪制的生長(zhǎng)曲線成典型的“S”型。(2)在成骨誘導(dǎo)條件下,堿性磷酸酶及鈣鹽沉積均呈陽(yáng)性表達(dá);在成脂誘導(dǎo)條件下,油紅O染色為陽(yáng)性。(3)ALP濃度在誘導(dǎo)組與非誘導(dǎo)組之間存在組間差別,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組ALP濃度均高于非誘導(dǎo)組(P0.05,n=5),誘導(dǎo)組ALP濃度在不同誘導(dǎo)時(shí)相其濃度變化趨勢(shì)不同(P0.05,n=5);鈣離子濃度在誘導(dǎo)組與非誘導(dǎo)組之間存在組間差別,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組鈣離子濃度高于非誘導(dǎo)組(P0.05,n=5)。誘導(dǎo)組鈣離子濃度在不同誘導(dǎo)時(shí)相其濃度變化的趨勢(shì)不同(P0.05,n=5)。 結(jié)論:脂肪干細(xì)胞強(qiáng)大的體外增殖和自我更新能力以及良好的成骨分化潛能使其有望成為理想的骨組織工程的種子細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【圖文】：

原代 ADSCs 接種后第 1 天，僅有少量短梭形或小多角形細(xì)胞散在貼壁，大部分未貼壁細(xì)胞為雙凹形的紅細(xì)胞(圖 1-4)，呈一簇一簇狀聚集，飄落在培養(yǎng)瓶底，但并不貼附于瓶底，此外還可見(jiàn)一些漂浮的雜質(zhì)。第一次換液后，未貼壁細(xì)胞和漂浮的雜質(zhì)已去除，可見(jiàn)大部分貼壁細(xì)胞呈寬大扁平的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞（圖 1-5），其間也可見(jiàn)少量三角形、多邊形細(xì)胞，均勻的分布于培養(yǎng)瓶底。培養(yǎng) 5 ～ 6d 后細(xì)胞可達(dá) 8 0 ％～ 9 0 ％匯合，這些貼壁細(xì)胞形態(tài)為典型的長(zhǎng)梭形細(xì)胞，呈大小不一的集落狀、漩渦狀生長(zhǎng)（圖 1-6、1-7）。培養(yǎng) 7～ 9 d 可形成 1 0 0 ％融合的致密單層。傳代后細(xì)胞形態(tài)變化不大，主要為長(zhǎng)梭形，少數(shù)為三角形或多邊形，呈漩渦狀生長(zhǎng)，增殖能力旺盛，細(xì)胞生長(zhǎng)速度較原代細(xì)胞明顯增快，3-4d 可長(zhǎng)滿(mǎn)，培養(yǎng) 20 天以上未見(jiàn)自發(fā)性鈣鹽沉積。連續(xù)傳 9 代，仍保持良好的細(xì)胞形態(tài)與增殖能力，細(xì)胞形態(tài)與生長(zhǎng)狀態(tài)均變化不大（圖 1-8、1-9）。

原代 ADSCs 接種后第 1 天，僅有少量短梭形或小多角形細(xì)胞散在貼壁，大部分未貼壁細(xì)胞為雙凹形的紅細(xì)胞(圖 1-4)，呈一簇一簇狀聚集，飄落在培養(yǎng)瓶底，但并不貼附于瓶底，此外還可見(jiàn)一些漂浮的雜質(zhì)。第一次換液后，未貼壁細(xì)胞和漂浮的雜質(zhì)已去除，可見(jiàn)大部分貼壁細(xì)胞呈寬大扁平的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞（圖 1-5），其間也可見(jiàn)少量三角形、多邊形細(xì)胞，均勻的分布于培養(yǎng)瓶底。培養(yǎng) 5 ～ 6d 后細(xì)胞可達(dá) 8 0 ％～ 9 0 ％匯合，這些貼壁細(xì)胞形態(tài)為典型的長(zhǎng)梭形細(xì)胞，呈大小不一的集落狀、漩渦狀生長(zhǎng)（圖 1-6、1-7）。培養(yǎng) 7～ 9 d 可形成 1 0 0 ％融合的致密單層。傳代后細(xì)胞形態(tài)變化不大，主要為長(zhǎng)梭形，少數(shù)為三角形或多邊形，呈漩渦狀生長(zhǎng)，增殖能力旺盛，細(xì)胞生長(zhǎng)速度較原代細(xì)胞明顯增快，3-4d 可長(zhǎng)滿(mǎn)，培養(yǎng) 20 天以上未見(jiàn)自發(fā)性鈣鹽沉積。連續(xù)傳 9 代，仍保持良好的細(xì)胞形態(tài)與增殖能力，細(xì)胞形態(tài)與生長(zhǎng)狀態(tài)均變化不大（圖 1-8、1-9）。

胰酶消化后細(xì)質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大， 圖 1-4 原代培養(yǎng) 1 天后可見(jiàn)大量漂浮的紅細(xì)胞和雜細(xì)胞之間不再連接成片 ×10 質(zhì)及少量呈小梭形、小多角形貼壁細(xì)胞，×10圖 1-5，原代首次換液后，未貼壁細(xì)胞和漂浮的雜質(zhì) 圖 1-6，原代培養(yǎng) 4 天后，融合超過(guò) 60%，已去除，可見(jiàn)大部分貼壁細(xì)胞呈寬大扁平的成纖維 細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化，×10細(xì)胞樣細(xì)胞，×10

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2763480