【摘要】：人的體細胞可以經(jīng)幾個轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)變?yōu)檎T導(dǎo)多能干細胞(iPS細胞)。這些細胞可以在體外自我更新、分化成三個胚層的細胞,避免了免疫排斥和倫理爭議等問題,在藥物篩選、疾病模型以及再生醫(yī)學(xué)等方面具有巨大的應(yīng)用潛力,獲得了人們的廣泛關(guān)注。目前,人iPS細胞可以從不同類型的體細胞,如皮膚細胞,血液細胞等誘導(dǎo)而來。何種類型的細胞更易獲取,且誘導(dǎo)效率較高并不明確。而且,大多數(shù)iPS細胞的研究采用了病毒方法,由此引起的安全性問題限制了iPS細胞進一步的應(yīng)用。為加速人誘導(dǎo)多能干細胞的研究,優(yōu)化出一套無飼養(yǎng)層細胞、無病毒插入、無動物血清的誘導(dǎo)流程非常關(guān)鍵。在基礎(chǔ)上建立一個具有廣泛遺傳背景的非整合的人iPS細胞庫將是一個重要的疾病模型和機理研究的資源。 我們的匿名調(diào)查結(jié)果顯示尿液是最被捐贈者接受的成體細胞捐贈材料。我們優(yōu)化的收集方法可以成功地從不同年齡、性別及疾病患者尿液中分離出尿液細胞。我們已收集到患有神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等疾病或者正常人的近50株尿液細胞,這些細胞捐贈者年齡從2歲到70歲不等。 利用這些尿液細胞,我們優(yōu)化了非整合誘導(dǎo)的重編程流程。這一流程采用附加體將重編程因子導(dǎo)入尿液細胞中,整個過程不使用飼養(yǎng)層細胞、不使用病毒載體、并采用成分完全確定的人多能干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。我們驗證最后得到的人iPS細胞無外源基因整合且具有多能性。與此前報道的附加體重編程方法相比,由于尿液細胞具有上皮細胞特性更易重編程,誘導(dǎo)時間縮短為20天,效率最高達到0.015%。另外,可以使用更少的重編程因子進行誘導(dǎo),通過采用miR-302-367簇代替癌基因c-MYC,從而獲得更加安全的人誘導(dǎo)多能干細胞。 我們優(yōu)化的尿液細胞重編程方法具有廣泛的適應(yīng)性,可用于重編程此前收集到的不同年齡、性別及疾病患者的尿液細胞。運用這一方法,我們已經(jīng)將20個不同個體來源的尿液細胞重編程得到了97株人iPS細胞系。這些非整合的人iPS細胞經(jīng)過一系列的鑒定后將給予凍存,組成尿液細胞來源的人iPS細胞庫。 我們將繼續(xù)從尿液細胞的收集和培養(yǎng),尿液細胞的誘導(dǎo)因子導(dǎo)入方法以及人iPS細胞的培養(yǎng)等方面優(yōu)化整個重編程流程,使得整個過程滿足cGMP的要求,從而為人iPS細胞在基礎(chǔ)研究和再生醫(yī)學(xué)方面的實際應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 尚慧;皖東牛皮膚成纖維細胞體外培養(yǎng)建系及生長特性鑒定[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

2 何永培;人尿液源性干細胞誘導(dǎo)多潛能干細胞來源的神經(jīng)嵴細胞模型的建立[D];華中科技大學(xué);2016年

本文編號：2754916