【摘要】：蓖麻毒素（RT）由RTA、RTB兩個(gè)肽鏈以二硫鍵共價(jià)相連接。RTB是能與半乳糖/N-乙�；肴樘前诽囟ńY(jié)構(gòu)結(jié)合的外源凝集素蛋白，具有凝集素活性。RTB本身無毒性，但可以幫助RTA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞溶質(zhì)中，抑制蛋白質(zhì)的合成。文獻(xiàn)報(bào)道，RTB可以用作異源性疫苗抗原的載體，可融合不同的輪狀病毒抗原VP7、P24、NSP4等，發(fā)揮粘膜佐劑作用。課題組前期研究亦發(fā)現(xiàn)RTB作為佐劑能誘導(dǎo)產(chǎn)生狂犬病毒中和抗體，抗體水平顯著高于普通氫氧化鋁佐劑疫苗，并能加速狂犬病毒疫苗誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答。然而對(duì)于RTB更多的生物學(xué)活性及機(jī)制研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道甚少。RTB對(duì)免疫細(xì)胞活化及細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。本研究采用分子生物學(xué)與免疫學(xué)技術(shù)探討了RTB對(duì)免疫細(xì)胞活化及細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響。首先探討了RTB對(duì)小鼠免疫細(xì)胞活化功能的影響。研究發(fā)現(xiàn)，RTB可明顯促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖；促進(jìn)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中Th1型細(xì)胞因子的分泌；并發(fā)現(xiàn)RTB可促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的增殖和活化。RTB對(duì)小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞的活化功能與機(jī)制研究表明：RTB可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞NO的分泌；促進(jìn)iNOS基因與蛋白的表達(dá)；增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力；促進(jìn)IL-6和TNF-α基因與蛋白的表達(dá)。采用小鼠蛋白芯片抗體陣列對(duì)巨噬細(xì)胞與炎癥相關(guān)的40種蛋白的變化進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MCP-1、TNF-α、MIP-1α，MIP-1β，MIP-2，RANTES，TIMP-1，CD54的表達(dá)增高，G-CSF、KC的表達(dá)下調(diào)。RTB對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞活化過程中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響研究表明：酪氨酸蛋白激酶介導(dǎo)的信號(hào)通路抑制劑、蛋白激酶C信號(hào)通路抑制劑和核因子κB信號(hào)通路抑制劑，可以抑制RTB誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞NO分泌和iNOSmRNA表達(dá)以及TNF-α和IL-6mRNA和蛋白水平表達(dá)，提示酪氨酸蛋白激酶、蛋白激酶C和核因子κB信號(hào)通路可能參與RTB誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化。采用RTB對(duì)酪氨酸蛋白激酶信號(hào)通路相關(guān)磷酸化位點(diǎn)分子進(jìn)行蛋白組學(xué)分析，結(jié)果提示RTB通過影響RAW264.7細(xì)胞酪氨酸蛋白激酶信號(hào)途徑SRC、JAK-STAT和核因子κB信號(hào)途徑IκB-α蛋白磷酸化，激活酪氨酸蛋白激酶和NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 Western blot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)RTB通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞IκB-α磷酸化進(jìn)而促進(jìn)NF-κB核轉(zhuǎn)位作用。 上述結(jié)果提示RTB可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活化，對(duì)巨噬細(xì)胞的活化可通過細(xì)胞內(nèi)的多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與。提示RTB誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化可能通過多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑互相調(diào)節(jié)、共同作用。本研究為RTB免疫生物學(xué)活性研究及其免疫佐劑等方面的應(yīng)用提供了新的科研資料，并奠定了實(shí)驗(yàn)依據(jù)與理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392.12

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本文編號(hào)：2747833