【摘要】：單鏈抗體(Single-chain，F(xiàn)v)是利用基因工程的方法，將免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(V_H)和輕鏈可變區(qū)(V_L)用一連接肽(Linker)相連接而成的，具有抗原特異性強(qiáng)、分子量小、組織穿透力強(qiáng)、體內(nèi)滯留時(shí)間短、血中清除快、無(wú)Fc段所引起的非特異性反應(yīng)、C-端能與其它分子相連接等優(yōu)點(diǎn)，因而在腫瘤臨床定位診斷、導(dǎo)向性治療以及基礎(chǔ)理論研究等方面具有十分重要的作用�？谷死w維蛋白單鏈抗體scFv-8E5的輕、重鏈可變區(qū)基因是從抗人纖維蛋白單克隆細(xì)胞系8E5中提取的，該單鏈抗體能特異性識(shí)別人纖維蛋白β鏈7肽，因而在血栓病的定位及導(dǎo)向溶栓等方面有誘人的應(yīng)用前景。近來(lái)的研究表明，單鏈抗體若能形成二聚體結(jié)構(gòu)，可以明顯提高其抗原結(jié)合力及其自身的穩(wěn)定性。同時(shí)，用連接肽連接異源的輕、重鏈可變區(qū)基因，形成的二聚體可以同時(shí)識(shí)別二種不同的抗原，即具有雙特異性，這在臨床應(yīng)用中具有十分重要的價(jià)值。本文利用已有的抗人纖維蛋白單鏈抗體scFv-8E5，利用基因工程的方法，對(duì)其連接肽進(jìn)行了改造，分別用三種連接肽取代原有連接肽以研究這些連接肽對(duì)該單鏈抗體二聚體形成、抗原結(jié)合力、穩(wěn)定性的影響。 方法：以人工合成三種新的連接肽DNA作為引物的一部分，經(jīng)PCR擴(kuò)增分別將這三種新連接肽插入V_H與V_L之間，取代原有的連接肽，用SDS-PAGE觀察表達(dá)結(jié)果，用ELISA法檢測(cè)其抗原結(jié)合力及穩(wěn)定性。 結(jié)果：本文新構(gòu)建的三種質(zhì)粒pOPE51-8E5-5、pOPE51-8E5-10A、pOPE51-8E5-10B均能在大腸桿菌JM109中表達(dá)，它們的表達(dá)產(chǎn)量均高于
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1998
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【圖文】：

結(jié)周陣白popE51一8E5一5，popE51一8E5一loA，p:海生物工程公司合成的引物，以poP們所需的片段，經(jīng)Puvn和Mull雙酶含有我們所設(shè)計(jì)的三種連接膚DNA.Pvull和Mull雙酶切后獲得的載體片pE51一8E5一5、popE51一8E5一loA、popE5109菌，在LBGA平板上挑選出陽(yáng)性養(yǎng)擴(kuò)增提取質(zhì)粒，瓊脂糖電泳初步篩m酶切篩選，去除假陽(yáng)性，再用PCR法中各有20一30個(gè)克隆是我們所需要的，研究.

popE51一8E5經(jīng)puvn、M一ul酶切后的電泳PE5r，sE，質(zhì)粒，2.poPE51一sES質(zhì)粒用腳un酶切，pE引一8E5質(zhì)粒Mlul酶切示為經(jīng)Puvn、Mull雙酶切切下的小片段圖3重組質(zhì)粒Hindm酶切電泳圖.·n

2popE51一8E5經(jīng)puvn、M一ul酶切后的電泳圖poPE5r，sE，質(zhì)粒，2.poPE51一sES質(zhì)粒用腳un酶切，popE引一8E5質(zhì)粒Mlul酶切頭所示為經(jīng)Puvn、Mull雙酶切切下的小片段

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳宇萍,王琰,王雅明,劉群英,朱迎春,化冰,高榮凱;抗紅細(xì)胞雙價(jià)小分子抗體的構(gòu)建及表達(dá)[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1997年03期

本文編號(hào)：2746799