【摘要】：目的: 自身免疫性疾病是目前公認(rèn)的一類難治性人類重大疾病,嚴(yán)重威脅人類健康。實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)由于與人的多發(fā)性硬化病(MS)和急性腦脊髓炎在臨床表現(xiàn)、生化指標(biāo)及病理等方面具有相同特征性,因而一直是研究神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病的良好模型,也是Th1細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病的典型代表。目前這類疾病的治療措施主要是長(zhǎng)期采用各種非特異的免疫抑制劑,往往會(huì)使患者免疫系統(tǒng)受到普遍性抑制而導(dǎo)致嚴(yán)重的感染和腫瘤發(fā)生等。因而有關(guān)自身免疫性疾病的特異性免疫治療一直是人們密切關(guān)注、有望成為一個(gè)突破口的研究熱點(diǎn)。在近年基礎(chǔ)免疫學(xué)研究進(jìn)展的啟發(fā)下,本課題選擇新近發(fā)現(xiàn)的活化T細(xì)胞的表面標(biāo)記IL-18受體(IL-18R)為靶點(diǎn),構(gòu)建重組免疫毒素IL-18-PE38的表達(dá)質(zhì)粒,并通過基因治療技術(shù)將其接種于EAE模型鼠體內(nèi),觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物EAE癥狀及體征的改善情況以及相關(guān)細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化來評(píng)價(jià)其治療效果,并探討其抗自身免疫性疾病的作用機(jī)理。 方法: (1)采用RT-PCR法從小鼠肝總RNA中擴(kuò)增mlL-18目的基因片段,
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

利用Triozl試劑獲得小鼠肝總RN.A，RNA電泳結(jié)果如圖1一1所示，可見三條明顯的主帶，分別是5s一5.85，185和285，條帶亮度良好，各條帶區(qū)分明顯，說明獲得的總RNA濃度和純度均較高。圖1一1小鼠肝總RNA電泳圖Fgil·1EleertoPhoresisPa材七mofotatlRNAoflivertissue1.2R-TPCR的擴(kuò)增產(chǎn)物以小鼠肝總RNA為模板，用m幾一18的特異性引物，通過Rl’-pCR擴(kuò)增反應(yīng)后

顯示一條約46sobp大小的片段;而用Ndel艦indl、托nd皿EcoUI及NdeE/lco肚進(jìn)行雙酶切反應(yīng)后，則分別顯示有48obp、11sobp及1640bp左右的目的條帶，如圖1一3所示，這些片段的大小分別符合幾一18、PE38及幾一18一PE38基因片段的大小。因而從酶切結(jié)果顯示，目的基因片段已正確插入到原核表達(dá)載體并構(gòu)成了重組質(zhì)粒PRKL一幾18一E38，其結(jié)構(gòu)示意圖譜如圖1一o4

Fgil一6LI一18一PE38序列測(cè)定DNAseuqneeeofL一18一PE38gnee

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號(hào)：2744793